国家食品药品监督管理局办公室关于印发酶联免疫法检测试剂注册技术审查等6项指导原则的通知
食药监办械函[2013]3号
为加强对医疗器械注册工作的监督和指导，提高注册工作水平和审查质量，国家食品药品监督管理局组织制定了酶联免疫法检测试剂注册技》术审查等6项指导原则(见附件)，现予印发，供医疗器械注册相关机构和人员参考。
附件：1.酶联免疫法检测试剂注册技术审查指导原则
2.发光免疫类检测试剂注册技术审查指导原则
3.核酸扩增法检测◇试剂注册技术审查指导原则
4.金标类检◇测试剂注册技术审查指导原则
5.生物芯片类检测试剂注册技术审查指导原则
6.一次性使用透析器产品注册技术审查指导原则
国家食品药品监督管理局办公室
2013年1月4日
附件1
酶联免疫法检测试剂注册技术审查指导原则
一、前言
本指导原则主要针对酶联免疫类检测试■剂的主要原材料、生产工艺及反应∏体系、产品质量控制等环节提出▂指导性技术要求。
本指导原则系对酶№联免疫法检测试剂的※一般要求，申请人应依据【产品特性确定其中的具体内容╱是否适用，若不适用，需详细阐述其理由及相应的▂科学依据。
本指◥导原则是对申请人和审查人员的指导性①文件，但不包括注册◣审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强ζ 制执行，如果有能够满足相【关法规要求的其他方法，也可以☉采用，但是需要提供详∑ 细的研究资料和验证资料。应在遵循相↑关法规的前提下使用本指导原则。
本指导〗原则是在现行法规和标准体系以及当前认◣知水平下制订的，随着法规和标准的不←断完善、科学技术的≡不断发展，其相关内容也将进行适时∞的调整。
二、适用范围
本指导原则适用于有关病原微→生物检测的第三类体外诊断试剂的注册技术审查。其他酶联免疫法检测试剂(如作为二类管理的体外诊断试剂)可参考本指导原则执行。
三、基本要求
(一)基本原则
1.研制、生产用▲的各种原料、辅料等应制定其相应的质量标准，并应符合有关法规的㊣ 要求。
2.试剂生产企业应具备相应的专业技术人员、仪器设备以及适宜的生☆产环境，获得《医疗器械生产许可证》;同时，应按照《体外诊断试剂生产实施细则(试行)》的要求建立☆相应的质量管理体系，形成文〖件和记录，加∩以实施并保持有效运行;还应通过《体外诊断试剂生产企业质量管理◥体系考核评定标准(试行)》的考核。企业应对试剂的使用范围做出明确规定，并经国家药▲品监督管理部门批准。
3.诊断试剂的研制应当按照☆科学、规范的原则，各反应条件的选择和确定应符合基本的「科学原理。
4.试剂在研制、生产过程中所用的各种材料及工艺，应※充分考虑可能涉及的安全性方面的事宜。
5.生产和质量控制的⊙总体目标：保证试剂』使用安全、质量稳定、工艺可控、检测有效。
(二)原材料质量＠控制
1.主要生物原料□
与产品ぷ质量最密切相关的生物原料主要包括各种天然抗原◥、重组抗原、单克隆抗体、多克隆抗体以及多肽〒类、激素类ㄨ等生物原科。这类原料可用于包ξ被酶标反应板、标记相关酶(如辣根→过氧化物酶、碱性磷酸酶等)、中和反应用抗原或抗体、制备校准品〒(标准品)等。使用前应¤按照工艺要求对这类生物原●料进行质※量检验，以保证其达到规定⌒的质量标准。主要生物原料若▲为企业自己生产，其工艺必须相对稳定▃;若购买，其供应商要求◢相对固定，不能随意变更供〒应商，如果主要←原料(包括工艺)或其∮供应商有变更，应依据国家相关法规的要求◢进行变更申请。
主要生物原料的╱常规检验项目一般包括：
(1)外观
肉眼观察，大部分生物原料为澄清均一的液体，不含异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒;或者ζ 为白色粉末，不含其他ζ颜色的杂质;特殊生物原料应具№备相应外观标准。
(2)纯度和分≡子量
主要经SDS-PAGE 电泳后，利用电泳扫描仪进行分析，也可用其╲他适宜的方法，如高效液相︻法等。根据所检『测生物原料的分子量选择适宜聚▽丙烯酰胺凝胶浓度进行电泳，一般每个电泳道加样量为5μg，电泳后的凝胶可用考马斯亮蓝染色或银染法染√色。染色后的凝胶用电泳扫描①仪分析原料的纯》度和分子量，纯度应达到相应的质ζ量标准，分子量▽大小应在正确的条带位置。
(3)蛋白浓度
蛋白浓度可▓通过Lowry法、280nm 光吸收法、双缩▃脲法或其他适宜的方法进行检测。
(4)效价
效价〓的测定一般根据蛋白含量测定结果，通过倍比稀释法〗进行。效价应达到规定的要求。
(5)功能№性实验
功能性实】验是指∩生物原料用于试剂盒实际生产中的情◎况，一般考查使用该原料的试剂盒的灵敏度、特异性和稳定性∑等，并比较其与△上批次原料的相关性。
2.生物辅料
生物辅料一般指在生产◤过程中作为蛋白保护剂用途的一类々生物原料，主要包括Ψ 小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。这些生物原料的质量标准应符合2000年版的《中国生物制品主＠ 要原辅材料质控标准》规定的标准要〖求，并且要适合ω 于本企业的生产。建议作以下检◣验：
(1) 牛血清或ξ 羊血清
外 观：为浅黄色澄清稍粘稠的液体，无溶□ 血或异物。
无菌试验：将血清直接〖37℃放置7天，明』亮处观察，不得出现混浊或沉淀。
总→蛋白含量：用双缩脲法测【定，蛋白含量≥32mg/ml。
球蛋白〓含量：取待☆测血清1ml，采用饱和硫酸铵法卐进行沉淀，沉淀溶于0.85%氯化钠溶液，至1ml，用Lowry方法测定，蛋●白含量应≤2mg/ml。
(2) 牛血清白蛋白：
外 观：应为浅黄色、黄色或乳白↙色的冻干粉末，无吸潮，无结块，无肉眼可见的其它杂质颗粒。
溶解性：将牛血清白蛋白配成10%溶液，在18~26℃时，溶解时间应≤15分钟，pH值应为6.5~7.1。
总蛋白〇含量：用双缩脲法，其标准为≥95%。
总蛋白中的牛血清白蛋白(BSA)含量：采用硝酸纤维素膜ξ电泳法，其标准为≥95%。
BSA的净含量：总蛋白∑ 含量乘总蛋白中的BSA含量，其标准为≥90%。
(3) 酪蛋白：
应符合生产所需的质量】标准。
(4)标记用酶
应在产品的质↑量标准中明示所使用的标记用酶的名称(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)，同时应根据不同生产厂家的检验▓方法和质量标准进行检验，酶的纯度RZ值(OD403nm/OD280nm)应大于3.0。
对于小牛血√清或山羊血清、牛血清白蛋白以★及酪蛋白等，还应进行功¤能性实验，即以其为原料配制一定浓度的稀释液作为样品，进行酶联免疫测定，均不能出现非特异性反应。
生物辅料的供应商同样要■求相对固定，不得随意ω 变更供应商。
3.化学原材料
化学原材料的质量标准，包括外观、一♀般盐类检测、溶液pH值、溶解情况、干燥失重、炽灼残渣等，均应符合《中国生物制品主要原辅材╲料质控标准(2000年版)》分析纯级别的要求，并且要适合于本企业的生产。
主要化学ω 原材料的供应商要求相对固定，不得随意★发生变更。化学原材料在购入时，原材〗料的生产商必须提供该批次化学原材料的质量保证材料和质量检验报告。
4.其他物料
(1) 酶标板
①外观
明亮处用肉眼观察板条的外观质量，如有欠注、飞边、肮脏、表面光洁度差，底部有波纹及划伤等应剔除。
②吸附能力和精密性
采用∑合适的方法进行检验。
一般用一定浓度的正常人免疫球蛋白G(IgG)包被板条，再用一定浓度的抗人IgG酶结合物吸附，通过显色反应，使用酶标仪读数，计算CV值。CV值结果应符合相关产品的功能性质量标准，一般批内CV≤5%，批间CV≤10%。
(2)液体试剂装量瓶
包括阴阳性对照、样品稀♂释液、洗涤液、酶结合物或酶稀释液、底物或底物缓冲液等液体组分，均应有相应的装量瓶，并建立相应的质量控制标准，如不同的液体试剂所用的装量瓶规格、装量〒瓶的颜色、瓶盖的颜色等。
(3)其他材料
包括试剂瓶标签、粘胶纸、铝箔袋、衬垫、可密封塑料袋、说明书、干燥剂和包装外盒□ 等，应参照国家食品药品监督管理局发布的《体外诊断试剂说」明书编写指导原则》和《医疗器械说明书、标签和包装标识△管理规定》建立相应质量控制标准。
5.企业质控品
企业质控品一般包括阴/阳』性参考品的符合率、灵敏度(最低检出量※〇)、精密性、钩状效应(hook效应)等质控样品，对于定量ζ 检测试剂，还包括线性质控品样品。如该产品具有国家标准品或参考品，应使用国家标准品(参考品)进行标化;若该◆诊断试剂没有国家标准品(参考品)，则企业参考品的制※备应有规范的质量ζ控制程序，以保证产品的↓安全性、有效性及●质量可控，其ㄨ质量应不低于国家食品药品监督管理局已经批准的同类产品的质量。
企业质控品的基质应与诊断试剂的待测样品的基质基本一致，如待测样品为血清/血浆，质控品基质也应为血清/血浆。
(三)试剂盒各组分的生∮产
酶联免疫法检测试剂主要∮组分的生产包括酶标记○物的制备及滴配过程(酶工作液浓度确定)、各︼种工作溶液的配制、包被酶标反》应板、分装及包装等步骤;并通过产品的半←成品检验和成品检验两个质控过程来保证其〓质量符合※规定。
1.各种工作◎液的配制
酶联〖免疫诊断试剂研制生产过程中所︼用的工作液一般包括：包被液、封闭液、阴★性阳性对照、样】品稀释液、洗涤液、酶结合物或酶稀释液、底物或底物缓冲液、终止液等，对定量检测♀试剂，还包括标准品(或校准品)溶液。若阴性、阳性对照或其◎他液体组分涉及生物安全性问题，制备时应在相应的生物安全实验室完成。
各种工作液在配制过程中应严格按质量标准中的配方进行配制，充分混匀确保液体中的各种成分均匀，同时进行相应的质量检验♀并达到质量标准后，方可使●用或分装。对于定量检测试剂，其标准品(或校准品)溶液应具『有量值溯源性。
应对配制过程及配制的液体进行的质量控制，主□要包括酶结合物的功能性实验及稳定性;各种溶液的外观、pH值等;酶作用底物应测定在无相应酶的情况下自身显色的情况，并制定合理的限定指标;终止液应对其终止酶促反应的能力进行测定。
2.包被酶标反应板
包被前应对酶标反应板进行质量检验，如尺寸、外观、包装、吸附性能、精密性等，并记录酶标反应板的批号、数量、标识。酶标反应板经检验合格后方能用于包被。不同批号的板条不能混用。
选择经检验合格的包被原料(如抗原、抗体等)，经一定的方法确定最佳包被浓度和酶结合物工作浓度，按︾照诊断试剂的生产规程，配制包被缓冲¤液、封闭液，经检验合格后，包被酶标反应板，经干燥后，已包被的酶标反应板用铝箔纸封闭(内︻置干燥剂)，保存于2~8℃。
应对包被过程进行相应的质量控制，如︾包被用原料(抗原或者抗体等生物活性原料)的质量检验、包被液和封闭液》的质控(如配方、外观、pH值)、包被过程的◣监控(包括包被和封闭的体积、温度、时间等)、包被均一性检验、干燥过程的监控等。
3.分装★和包装
样品稀释液、洗涤液、酶结合物或酶稀释液、底物或底物缓冲液等溶液应严格按照质量标准中的量进行〓过滤后再分装，分装量的误差应小于5%。
分装及包装均应按照相应的标准操作√规程要求进行。包装前，应严格检查试剂盒的品名、批号等，核】对各试剂盒各组分的数量，并在关盒前『进行复核〓。
(四)质量控制
1.半成品质◥量控制
(1)半成品抽样
检验人员按试剂的批号，根∩据抽样申请单抽取规定数量的半成品各组分，作号标记、待检。
(2)半成品检〓验
根据试剂盒的企业标准或者制检规程进行半∞成品的检验。
半成品『检验，一般使用国家标准品(参考品)或经国∩家标准品(参考品)标化后的企业参考品◥。若某类试剂没有国家标准品(参考品)，则使用〇企业参考品∞，企业【参考品的制备应有规范的质量控制程序，以保证产品的安全】性、有效性及质量可♀控，其质量应不低于国家食品药」品监督管理局已经批准的同类产品的质量。
检︽验指标一般包括阴/阳性参考品的符合率、灵敏度(最低检出量)、精密性等，均应达到相应的质量标准要求。对于精密」性，一般情况下CV不得高于15%(采用竞争抑制法的诊断试剂CV不得高于20%)。对定量检测试剂，同时应分析其线』性相关系数和定量质控品检测结▅果的准确性。
企业应该对每一批试剂的【半成品进行稳∑ 定性研究≡。试剂盒各组分应留样，2~8℃定期作稳定性考核，同时作37℃热稳定性试¤验「，试验结果应符合产品的质量标准。
2.成品质量控∩制
产品包装完成后，质检人员根据试剂的批号、实际包装量、抽样申请单的要求进行抽样，同时填写抽样数量和抽样日期，并且由抽样人签名。抽样数量应▲包括检验用数量和留样数量。质检人员同时应↘检查相关原始记录。
每一批酶联免疫类检测试剂的试生产量应满足工艺】研究、分析性能验证、稳㊣ 定性研究、临床试验、自测及注册检验等各阶段所需样品量的要求。
(1)成品检验
成品检验时，一般使用国家标准品(参考品)或经■国家标准品(参考品)标化后的企业参考品，并达到相应质量要求。若该诊断试剂没有国家标准品(参考品)，则使用企业参考▅品，企业参考品的制备应有↙规范的质量控制程序，以保证▂产品的安全性、有效性及质量」可控，其质量应不低々于国家食品药品监督◥管理局已经批准的同类产品的质量。
(2)稳定性试验
在批放行前，每一批试剂→应完成37℃热稳定性∞试验，试验结果应符合产品的质量标准。
四、名词解释
酶联免疫法：是指在酶标板上包被特定的抗原(和/或抗体)后，利用直接或间接的方法与待测样品中的相关抗体(和/或抗原)反应，形成的抗原抗体复合物再与相应的酶标记的抗体和/或抗原进一步反应，经过酶催化底物发生显色反应，由形成的颜色的强弱来判断样本中相应的抗体和/或抗原的ㄨ存在。
五、参考文献：
1.《中△国生物制品规程》(2000年版)，化学工业出◎版社
附件2
发光免疫类检测试剂注册技术审查指导原则
一、前言
本指导原则╱主要针对发光免疫类检测试剂的主要原材料、生产工艺及反应体系、产品卐质量控制等环节提出指导性技术要求。
本指导原则系对发光免█疫类检测试剂的一般要求，申请人应依据产品特性确定其中的具〗体内容是否适用，若不适用，需详细阐述其理由及相↑应的科学依据。
本指导原则是对申请人和审查人员的指●导性文件，但不包括注册审批№所涉及的行政事项，亦不㊣作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采★用，但是需要提供详细的研究资▂料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下㊣使用本指导原则。
本指导原则是︽在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制订的，随着∑法规和标准的不断完善、科学技术的不断发展，其相关内容也⌒ 将进行适时的调整。
二、适用范围
该指导原则主要适用于利用发光免疫分析技术↑对蛋白质等被测物质进行检测的第三类体外诊断试剂的注册技术审查，第二类试剂的生产及质量控制可参考该指导原则执行
三、基本要求
(一)基本原则
1.研制、生产用的各种原料、辅料应当制定相应的质量标准，并符合有关法规的要求【。
2.诊断试剂的生产企业应具□ 备相应的专业技术人员、仪器设备以及适宜的生产环境◣，获得《医疗器械生产许可证》;同时，生产企业应按照《体外诊断试剂生产实施细则(试行)》的要求建立相应的质量管】理体系，形成文件和记录，加以实㊣ 施并保持有效运行;生产企业还应该☆通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准(试行)》的考核。企业应对试剂的使用范围做出明确规定，并经国家药品监督管㊣ 理部门批准。
3.诊断试剂的研制应当按照科学、规范的△原则组织研发，各反应条件的选择和确定应符合基本的㊣ 科学原理。
4.研制生产过程中所用的材料及工艺，应充分考虑可能涉及的安全▅性方面的事宜。
5.试剂生产和质量控制的总体目标：保证产品使用安全，质量稳定，工艺可控，使用有效。
(二)原材料⌒质量控制
1.主要生物原料
与产品「质量最密切相关的生物原料主要包括各种天然抗原、重组抗原、单克隆抗体、多克隆抗体以及多肽类、激素类等生物⌒原科。这类原料可用于包被酶＠标反应板、标记相关酶(辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)、中和反应用抗原或抗体、制备校准品(标准品)等。一般按工艺要求对这类生物原々料进行质量检验，以保证其→达到规定的质量标准。主要生物原料若为企业自己生ζ 产，其工艺必须相对稳定;若购买，其供应商要求相对固定，不能随意变更供应商，如果主要原料(包括工艺)或其供〖应商有变更，应依据国家相关法规的要求←进行变更申请。
主要生物原料的常规检验项目一般包括：
(1)外观
肉眼观察，大部分生物原料为澄清均一的液体，不含异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒;或者∮为白色粉末，不含其他颜色杂质;特殊生物原料应具备相应外观标准。
(2)纯度和分子量
主要经SDS-PAGE 电泳后，利用电泳扫描仪进行◆分析，也可用其他适宜①的方法，如高效〇液相法等。根据所检★测生物原料的分子量选择适宜聚丙烯酰胺凝胶浓度进行电泳。一般每个电泳道加样量为5μg，电泳后的凝胶可用考马斯亮蓝染色或银染法染色。染色后的凝胶用电泳扫描仪分析原料的纯度◣和分子量，纯度应达到相应的质量标准，分子量大小应在正确的条带位置。
(3)蛋白浓度
蛋白浓度可通○过Lowry法、280nm 光吸收法、双缩脲方Ψ 法等进行检测。
(4)效价
效价的测定一般根据蛋白含量测定结果，通过倍比稀释法进行。效价应达到规定的要求。
(5)功能性实验
功能性实验是指生物原料用于试剂盒实际生产中的情况，一般考查使用该原料的试剂盒的灵敏度、特异性和稳定性①等，并※比较其与上批次原料的相关性。
2.生物辅料
生物辅料一般指在生产过程中作为蛋白保护剂用途的一类生物原料、主要包←括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白等。这些生物原料的质量标准应符合2000年版的《中国』生物制品主要原辅材料质控标准》规定的标准要求，并且要适合于本企业的生产。
建议作以下检验：
(1) 牛血清或⊙羊血清
外观：为浅黄色澄清稍粘稠的液体，无溶∮血或异物
无菌试验：将血清直接37℃度放置7天，放在明亮处观『察，不得出现混浊或沉淀。
总蛋白含◥量：用双缩脲ㄨ法测定，蛋白含量不小于32mg/ml。
球蛋白含量：取待〒测血清1ml，采用饱和硫酸铵法进行沉淀，沉淀溶于0.85%氯化钠溶液，至1ml，用Lowry方法测定，蛋白含量应≤2mg/ml。
(2) 牛血清白蛋白：
外观：应为浅黄色、黄色或乳白色的冻干粉末，无吸潮，无结块，无肉眼可见的◤其他杂质颗粒。
溶解性：将牛血清白蛋白配成10%溶液，在18~26℃时，溶解时间应不大←于15分钟。1%牛血清白蛋白水溶液的pH值应为6.5~7.1。
总蛋白含量：用双缩脲方测定，质量标准为≥95%。
总蛋白中的BSA含量：采用硝酸☉纤维素膜电泳法，其标准为≥95%。
BSA的净含量：总蛋白含量乘总蛋白中◢的牛血清白蛋白(BSA)含量，其标准为≥90%。
(3) 酪蛋白：
酸度应符合生产所需的质量标【准。
(4)标记用酶
应在产品的质量标♀准中明示所使用的标记用酶的名称(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)，同时应根据不同生产厂家的检验〓方法和质量标准进行检验，酶的纯度RZ值(OD403nm/OD280nm)应大于3.0。
对于小牛血清或山羊血【清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，还应进行功能性实ω验，即以其为原料配制一定浓度的稀释液作为样品，进行测定，均不得出现非特异性反应。
生物辅料的供应商同样要求相对固定，不得随意变更供应商→。
3.化学原材料
化学原材料的质量标准，包括外观、一般盐类∩检测、溶液pH值、重金属检测、溶解情况、干燥失重、炽灼残渣等，均应符合《中国生物制品主要原辅材料质＠控标→准(2000年版)》分析纯级别的要求，并且要适合于本企业的生产。
(1)无机类：主要包括有氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氯钠等。
(2)有机类：主要包括有吐温20、三羟基氨基甲烷等→。
(3)特殊化学原料：铕-DTTA，鲁米诺等。
铕-DTTA纯度分析与鉴定：要求铕-DTTA各功能团符合分子结构，纯度在96%以上。
4.其他原ξ 辅料
(1)微孔板条
外观：明亮处用肉眼观察板条的外观质量应无划痕、破损、飞边、肮脏、表面光滑。板条与微孔反应条塑料框架应配合合适。
材质：微孔反应板条每孔加200µL增强液，用发光免疫分析仪检测其荧光值，平均●本底荧光值≤1500。
吸附能力和精密性：用一定浓度的蛋白包被微孔板条，检测荧光值，CV值结果应符合相关产品的功能性质量标准，一般批内CV≤5%,批间CV≤10%。
(2)其他
粘胶纸、铝箔袋、说明书、包装外盒、瓶子和干燥剂等々应参照国家食品药品监督管理局发布的《体外诊断试剂说明书编写△指导原则》和《医疗器械说明书、标签和包装标识管理◥规定》建立相应质量控制标准。
(三)试剂盒各组分的╱生产
发光免疫分析试剂主要组分的生产包括包被反应板、标记物制备、各种溶液的配置、冻干、分包装等步骤;并通过产品的半成品检验和成品ζ检验两个质控过程来保证其质量符合规定。
1.固相载体的制备(因不同产品使用的包被载体有很大区别，在此以标准96孔微孔反应板为例进行描述)
(1)包被板的准备
准备经检验合格的包被板，记录批号、数目、状态标识。
质控项目：尺寸、外观、包装。
(2)包被︻液的配制
配制包被缓冲液，加入包被的抗体或抗原至工作浓度，混合均匀，即成所需的〓包被液，工作浓度的包被液应在规定时间内使用。
质控项目：包被缓冲液配方【、pH值、包被物成分。
(3)包被︼板的包被
包被液按工艺要求加入包¤被板。记录所包被的包ω 被板数量。
质控项目：包被体积、温度、时间、过程监控。
(4)洗板工作液∏的配制(按各单位工艺要求，可以不∩洗板)
按配方配制洗板工作液。
质控项目：洗板工作液配方、pH值。
(5)封闭液的配☆制
按配方配制封闭液。
质控项目：封闭液配╳方、pH值。
(6)洗板和☆封闭
包被完成后，抽去孔内包被液，用洗板工作液洗板后(按各单位工艺要求，可以『不洗板)，加入封闭╳液。
质控项目：封闭体积、温度、时间、过程监控。
质检项目：封闭前检验包被均一性。
(7)抽干
封闭后的反应※板，抽干孔内液体。
质控项目：过程监控。
(8)干燥
反应板应按工艺的要求进行干燥。
质控项目：温度、湿度、时间、过程监控等。
(9)密封包装
将干燥后⊙的反应板用铝箔袋密封包装，内放干燥剂(按各单位工艺要求，可以不放)。
质控项目：密封性能、标示及效期等。
(10)反应板(半成品)检验
对装袋密封后的反应♂板进行抽样检验，外观、板内变异、板间变异。
2.滴配过程
(1)酶结合物的制备(根据各产品实际情ξ况，该步骤可不进行)
采用常规过碘酸钠——乙二醇法将相关的抗体(或抗原)标记辣根过氧化物酶(或其他酶)，酶标记后的抗体(或抗原)应加入适当的保护卐剂保存于低温。
质控项目：标记方法、过程控制。
(2) 酶结合物的鉴定ξ
①功能性实验
将酶结合物用酶∮稀释液稀释后，用于产品的滴配，其结果应符合相关试◇剂盒的质量标准。
② 稳定性
将酶结合物用酶稀释液稀释，进行2~8℃热稳定性√实验，滴配结果应符合相关试剂盒的质量标准。
(3)酶结◆合物稀释液
按酶结合物稀释液的配方配制，存放在2~8℃保存，并于规定时间内使用。
质控项目：酶结合物稀释液配方、pH值。
(4)酶结合物工作浓度的滴配
取酶结合物，用酶结合物稀释液稀释到不同的浓度，用已制备好的反应板进行滴配。测定系列标准品及相应的质控品，确定使体系达到最优的酶结合物工作浓度。
(5)酶结▲合物工作液』配制
将所需量酶结合物和々酶结合物稀释液按滴配浓度混合均匀。
质检项目：分装◣前检验，用配套的反应板进行检验，外观、灵敏度、质控品测定值、定量产品应作校准品线性检测。
(6)酶结Ψ 合物工作液的分装
按工艺要求分装酶结♀合物工作液。
质控项目：分装前确认试剂名称、批号、数量，分装量，封装◣后密封性。
(7)酶结合物工作液(半成品)检验
对分装后︼的酶结合物工作液进行抽样检验，外观、分装量、灵敏度、校准品剂量-反应曲线∏线性、质控品测定值。
3. 校准品、阴/阳性对照或质控品的制〓备
(1)稀释液
按稀释液的配方配♀制，存放在2~8℃或-20℃保存，并于有效期内使用。
质控项目：稀释液配方、pH值。
(2)校准品、阴/阳性对照或质控品的配制
校准品、阴/阳性对照或质控品的配制应具有量值溯源性，可参照国家标准品、世界卫生组织标准品或其他级别的标准物质进行配♂制。
质检项目：分装前检验，准确性、剂量-反应曲线线性(定量产品)、质控品测定值。
(3)校准品、阴/阳性对◥照或质控品的分装
按工艺要求分装校准品、阴/阳性对照或质控品。
质控项目：分装前确认试剂名称、批号、数量，分装量。
(4)校准品、阴/阳性对照或质控品(半成品)检验
对分装后的校准品、阴/阳性对照或质控品』进行抽样检验，外观、分装量、准确性、剂量-反应曲线线性(定量产品)、质控品测定值。
4.化学发光√底物的制备
(1)底物缓冲液
按底物缓冲液的配方配制，存放在2~8℃保存，并于有效期内使用。
质控项目：底物缓冲液配方、pH值。
(2)化学发光底▃物(氧化剂和发光▃剂)的配制
分别按氧化剂和发光剂的配方在底物缓冲液中加入相应的氧化剂和发光剂
质控项目：氧化剂和发光剂配方。
质检项目：分装前检验，本底、发光强度。
(3)化学发光底〓物(氧化剂和发光剂)的分装
按工艺要求分装化学发光底物(氧化剂和发光剂)。
质控项目：分装前确认试剂名称、批号、数量，分装量，封装后密封性。
(4)化学发光底物(半成品)检验
对分装后的化学发光底物进行抽样检验，外观、分装量、本底、灵敏度、发光强度。
5.铕标记物的制备
针对不同的标记生物原料，确定不同的标记制备工艺，包括铕-DTTA与标记生物★原料的比例，标记ω 温度和标记时间、标记得率的计算标准↓等。在实际操作过程中要求严格按照标准操作规程进行操作
6.冻干
各种冻干品都需建立各自的冻干工艺，冻干品外ζ观应该呈现疏松的粉末状固体，具有一定★的形状，复溶完全、迅速，呈澄清透明液体。
7.分装、灯检Ψ 和贴签
分装量用减重称量法进行测量，把质量换算成体积后进行分装量的控制。灯检是目测检查各组分的色泽、分装量ω以及是否混浊、有杂质等。
8.包装
根据试剂盒包装标准操作规程及说明书的要求，以流水线操作形式进行包装。包装时应严格检查品名、批号、装量，认真核对各物料数∏量，并在关盒前进行复核。
(四)质量控制
1.半成品质量〓控制卐
(1)半成品抽样
检验人员按试剂的批号，根据抽样申请单抽取规定数量的半成品各组分，作号标记、待检。
(2)质控⊙品的要求
用于半成品质量控╲制的质控品包括阴/阳性样品符合率、灵敏度(最低检出量)、特异性、检测范围、定量曲线的线性、精密性、稳定※性等指标，如具有╳国家标准品或参考品的产品应使用国家标准品(参考品)或经国家标准品(参考品)标化的企业参考品进行卐检验。如无国家标准品(参考品)，可采用企业参考品，企业参考品的制备应有规范的质量控制程序，以保证产品的安全性、有效性及质量可控，其质量应不低于国家食品药品监督管理局已经批准的同类产品的质量。
(3)半成品检验
根据各个试剂盒的企业标准※或者制检规程进行半成品的检验，检验指标一般包括准确性、灵敏度、特异性、精密性、相关性等，均应达到相应的质量标准。
企业应对每一批试剂的半成品∞进行稳定↘性研究。试剂盒各组分应留样，2~8℃定期作稳定性考核，同时作37℃热稳定※性试验，试验结果应符合产品的质量标准。
2.成品质量控制
(1)成品抽样
产品包装完成后，质检人员根据试剂的批号、实际包装量、抽样申请单的要求进行抽样，同时填写抽样数量和抽样日期，并且由抽样人签名。抽样数量应包括检验用数量和留样数量。质检人员同时应检查相关原始记录々。
每一批发光免疫类检测试剂的试生产量应满足工艺研究、分析性能验证、稳定性研究、临床试验、自测及注册检验等各阶段所需样品量的要求。
(2)成品检验
一般使用国家标准品(参考品)对成品进↘行检验，并达到国家标准品(参考品)的质量要求。若该诊断试剂没有国家标准品(参考品)，则使用企业参♀考品，企业参考品的制备应有规范的质量控制程序，以保证产品的安全性、有效性及质量可控，其质量应不低于国家食品药品监督管理局已经批准的同类产品的质量。
在批放行前，每一批∏发光类诊断试剂应完成37℃热稳定性试验，试验结果应符合产品的质量标准。
四、名词解释
发光免疫类检测试剂：根据特异性抗原抗体反应等生物学原理，利用发光信号的强弱对样本中相应抗原或抗体进行定性或定量检测的一类试剂。主要包括化学发光(酶促、非酶促)，电化学发光和时间分辨荧光ㄨ等法。
五、参考文献
1.《中国生物制▆品规程》(2000年版)，化学工业出版社
附件3
核酸扩增法检测试剂注册技术审查指导原则
一、前言
本指导原则主要针对核酸扩增类检测试剂的主要原材料、生产工艺及反应体系、产品质量控制等环节提出指〒导性技术要求。
本指导原则系对核酸扩增法█检测试剂的一般要求，申请人应依据产品特性确定其中的具体内╱容是否适用，若不适用，需详细阐述〇其理由及相应的科学依据。
本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不⌒ 作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可〓以采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制订的，随着＠ 法规和标准的不断完善、科学技术的不断发展，其相关内容也将☉进行适时的调整。
二、适用范围
本指导原则适用于核酸扩增法检测试剂的注册技术审查，其他类核酸检测试剂可参照相关内容。
三、基本要求
(一)基本原则
1.核酸扩增类检测试剂的生产企业应获得《医疗器械生产许可证》。研制、生产用的各种原料、辅料等应制定其相应的质量标准，并应符合☆有关法规的要求。
2.试剂生产企业应↓具有与其技术要求相适应的人员、厂房、设施和仪器设备以及适宜的生产环境，配备满足核酸提取和扩增检测以及操作人员防护所需的设备。建立专用实验室，实验室应当严格分区，人员和物品应当单向流动，以最大限度地防止实验过】程中样品之间的污染和避免扩增产物的污染。生产用于病原微生物核酸检测的生产企业应建立符合生物安全要求的设施和措①施。
3.试剂生产企业应按照《体外诊断试剂生产实施细则(试行)》的要求，建立相应的质量管理体系，并应通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准(试行)》的考核。
4.核酸扩增类检测试剂的引物设计应当符合核酸检测设计的要求，扩增体系应设定合理的内标和外标，试剂需设置抗污染的特定措施，扩增产物须进行确证研究。
5.企业使用新型原材料时，应提供与通行原材料比对研究结果及相关」资料。使用未Ψ列入上述标准的化学试剂，应不低于分析纯。
(二)原材料
应提供主要原材料如引物、探针、企业参考品或标准品等的选择与来源、制备过程、质量分析和质量标准等的相关研究资料。若主要原材料为企业自己生产，其生产工艺必须相对稳定;如主Ψ要原材料来自市场(从其他单位购买)，应提供的资料包括：对物料供应商审核的相关资料、购买合同、供货方提供的质量标准、出厂检→定报告，以及该原材料到货后的质量检验资料。主要原材料(包括生产工艺)或其供应商发生变更，应依据国家相关法规的≡要求进行变更申请。
核酸类检测试剂的包装材料和耗材应无脱氧核糖核酸酶(DNase)和核糖核酸酶(RNase)污染。
1.脱氧三磷酸核苷(dNTP)
核酸的组成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP和dTTP。应为高效液相色谱(HPLC)纯、PCR级，无DNase和RNase污染。—20℃保存。
2.引物
由一定数量的dNTP构成的特定序←列，通常采用脱氧核糖核酸(DNA)合成仪人工合【成，合成后经聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他适宜方ω 法纯化。
冻干粉，序列正确，合成量应达到▽试剂生产要求。纯度应达到电泳级(PAGE)或HPLC级，不含杂带。应提供合成机构出具的合成产物的质检证明，如PAGE电泳结果或HPLC分析图谱。
应作HPLC分析和紫外光吸收分析。以紫外分光光⊙度计测定OD260nm/OD280nm的比值在1.6—2.0之间，可视为合╲格引物。-20℃保存。
3.探针
是指特定的带有示踪物(标记物)的已知核酸片段(寡聚核苷酸片段)，能与互补核酸序列退火杂交，用于㊣ 特定核酸序列的探测。通常采用DNA合成仪人工合成，合成后经聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他适宜方法纯化，在5-端(和/或3-端)进行标记，如荧光素报告基↓团或其他发光标记物，在3-端标记荧光素淬灭基团，并经HPLC或其他适宜方法纯化。
冻干粉，纯度应达到HPLC纯。应提供合成机构出具的合成产物的质检证明，如HPLC分析图谱;应对探针的核酸序列及标记的荧光素或化学发光物进行核实，并作HPLC分析。应以可见—紫外分光光度计进行200—800nm扫描，在260nm处应有吸收峰。另外，根据标记荧光素的不同，还应该在荧光素的激发波长处有吸收峰，如FAM荧光素在494nm、TET荧光素在521nm、TAMRA荧光素在560nm处有∏特异的吸收峰，杂交探针在493nm、625nm、685nm处有特异的吸收峰，检定合格后入库。避光、-20℃保存。
4.DNA聚合酶
如Taq DNA聚合酶。应具有DNA聚合酶活性◇，无核酸︽内切酶活性;具热▆稳定性，94℃保温1小时〖后仍保持50%活性。-20℃保存。
5.尿嘧啶糖基化酶(UNG)
具有尿嘧啶糖基化酶活性，无核酸外切酶及核酸内切酶活性，IU UNG在 37℃处理3分钟后，103拷贝∑ 以下含U模板应完全●降解，不能产生扩增产物。-20℃保存。
6.逆转录酶
具逆转录酶活性，无核酸内切酶⊙活性。—20℃保存。
(三)生产工艺
核酸扩增类检测试剂的基本生产工艺通常包括：配制工作液、半成品检定、分装和包装。配制工作液的各种原材料及其配比应符合〓要求，原材料应混合均匀，配制过程应对pH、电导率等关键参数进行有╱效控制。
工艺研究的资料应能对反应体系涉及到的基本内容，如样本类型、样本用量、试剂用量、反应条件、校准方法、质控方法、临界值的确定、稳定性和有效期，提供〗确切的依据。
(四)质量控制
1.半成品质量控制
(1)按批号抽取规定数量的半成品。
(2)以参考品/对照品进行半成品质量控制。如果产品具有国家标准品或参考品，应以其∑进行检定。如果产品不具有国家标准品或参考品，应根〗据规定制备相应的企业参考品，企业参考品的制备应有规范的质量控制程序，以保证产品的安全性、有效性及质量可控，其质量应不低于国家食品药品监督管理局已经批准的同类产品的质量。
(3)半成品检定内容包括：阴/阳性参●考品符合率、灵敏度、特异性、精密度。检测结果应符合质量标准的要求。
(4)半成品检定合格后，按试ω剂盒组成及时进行分装和包装。
2.成品质量控制
(1)每一批核酸扩增法检测试剂的试生产量应满足工艺研究、分析性能验证、稳定性研究、临床试验、自测及注册检验等各阶段所需样品量的要求。
(2)产品完成包装后，应根据生产量进行抽样和∩生产记录审核。
(3)以参考品/对照品进行成品质量检验。结果应符合要求。
(4)成品检验的内容应包括：阴/阳性∑ 参考品符合率、灵敏度、特异性、精密度、线性范围(定量产品)和稳定性。
5.试↙剂批放行前，应对需要进行稳定性考核的试剂成分，在特定温度或条件下进行稳定性试验。稳ξ 定性试验可采用加速破坏试验。
四、名词解释
核酸扩增法检测试剂：核酸扩增技术泛〒指以扩增脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)为手段，检测特定核酸序列或筛查特定基因的检测技术，如聚合酶链反应(PCR)、连接酶链反应(LCR)、转录依赖的扩增反应(TMA)等。核酸扩增法检测〒试剂是基于核酸扩增检测技术的体外诊断试剂，目前已经用于病原体检测、特定疾病的早期诊断和体内物质的型︾别鉴定等不同领域。
五、参考文献
1.《中国生物制品规程》(2000年版)，化学工业出版社
附件4
金标类检测试剂注册技术审◆查指导原则
一、前言
本指导原则主要针对金标类检测试剂的主要原材料、生产工艺及反应体系、产品质量控制等环节提出指导ㄨ性技术要求。
本指导原则系对金标类检测试剂的一般要求，申请人应依据产品特性确定其中的具体内容是否适用※，若不适用，需详细阐述其理由及相应的科学依据。
本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制☆执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采█用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制订的，随着法规和标准的不断完善、科学技术的不断发展，其相关内容也将进行适★时的调整。
二、适用范围
本指导原则适用于第三类体外诊断试剂中金标类试剂的注册∏技术审查，其他类金标试剂可作参考。
三、基本要求
(一)基本原则
1.诊断试剂的研制、生产用的各种原料、辅料应当制︼定相应的质量指标，并应符合有关法规的要求。
2.诊断试剂的生产企业应具备相应的专业技术人员、仪器设备以及适宜的生产环境，获得《医疗器械生产许可证》;同时，生产企业应按照《体外诊断试剂生产实施细则(试行)》的要求建立相应的质量管理体系，形成文件和记录，加以实施△并保持有效运行;生产企业还应该通过◥《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准(试行)》的考核。
3.诊断试剂的研制应当按照科学、规范的原则组织研发，各反应条件的选择和确定应符合基本的科学原理。
4.研制生产过程中所用的材料及工艺，应充分考虑可能⌒涉及的安全性方面的事宜。
5.生产和质量控制的总体目标：保证试剂使☆用安全、质量稳定、工艺可控、检测有效。
(二)原材料质量控制
1.主要生物原料
与生产的产品质量最密切相关的生物原料♂包括各种天然抗原、重组抗原、单克隆杭体、多克隆抗体以及多肽类生物原科。这类原料可』用于胶体金标记、包被硝酸纤维膜及用于制备质控线的抗原或抗体等。使用前应按照工艺要求对这类生物原料进行∏质量检验，以保证其达到规定的质量标准。主要生物原料若为企业自己生产，其工艺必须相对稳定;若购买，其供应商要求相对固定，不能随意变更供应商，如果主要原料(包括工艺)或其供应商有变更，应依据国家相关法规的要求进行变更申请。
主要生物原料的常规检验项目一般包括：
(1)外观
肉眼观察，大部分生物原料为澄清均一的液体，不含异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒;或者为◆白色粉末，不含其他颜色的杂质;特殊生物原料应具备相应外观标准。
(2)纯度和分子量
主要经SDS-PAGE 电泳后，利用电泳扫描仪进行分析，也可用其他适宜的方法，如高效液相法等。根据所检测生物原料的分子量选择适宜的聚丙烯ζ酰胺凝胶浓度进行电泳。一般每个电泳道加样量为5μg;电泳后的凝胶可用考马斯亮蓝染色或银染法染色。染色后的凝胶用电泳扫描仪分析原料的纯度和分子量，纯度应达到相应的质量标准，分子量大小应在正确的条带位置。
(3)蛋白浓度
蛋白浓度可通过Lowry法、280nm 光吸收法、双缩脲方法等进行检测。
(4)效价
效价的测定一般根据蛋白含量测定结果，通过倍比稀释法进行。效价应达到规定的要求。
(5)功能性实验
功能性实验是指生物原料用于试剂盒实际生产中的情况，一般考查使用该原料的试剂的灵敏度、特异性和稳定性等，并比较其与上批次原料的相关性。用于制备质控线的抗原或抗体可采用其他适宜方法进行功能性实验。
2.生物辅料
生物辅料一般指在生产过程中作为蛋白保护剂用途的一类生物原料，主要包括牛血清白蛋白等。这些生物原料的质量标准应符合《中国生物制品主要原辅材料质ぷ控标准(2000年版)》规定的质量标准要求并检验合格，达到相应的质量标准后方可用于生产。
建议对牛血清白蛋白作卐以下检验：
外观：应为浅黄色、黄色或乳白色冻干粉末，无吸潮，无结块，无肉眼可见的其他杂质颗粒。
溶解性：将牛血清白蛋白配成10%溶液，溶解时∴间在18~26℃时应∴不大于15分钟，pH值应为6.5~7.1。
总蛋白含量：用双缩脲方法≡来测定，其标准为大于等于95%。
总蛋白中的牛血清白蛋白(BSA)含量：采用硝酸纤维素膜电泳法，其标准为≥95%。
BSA的净含量：总蛋白含量乘以总蛋白中的BSA含量，其标准为≥90%。
生物辅料的供应商同样要求相对固定，不得随意变更供应商。
3.化学原材料
化学原材料的质量标准参照《中国生物制品◥主要原辅材料质控标准(2000年版)》分析纯级别进行『检验。主要的检测指标包括：外观、一般盐类检测、溶液pH值、溶解情况、干燥失重、炽灼残渣等。
主要化学原材料的供应商要求相对固定，不得随意发生变更。化学原材料在购入时，原材料的生产¤商必须提供该批次化学原材料的质量保证材料和质量检验报告，其质量标准应达到生产所需的质量标准。
4.其他物料
硝酸纤维素膜、玻璃纤维或Ψ 聚酯纤维膜及滤纸、玻璃♂纤维膜等在购入时，其生产商必须提供该批↘次材料的质量保证材料和质量检验报告，其质量标准应达到生产所需的质量标准。
(1)硝酸纤维素膜
硝酸纤维素膜应具有厚度、孔径大☆小等要求，毛∏细迁移速度，韧性(切割时膜破损引起的废品率)、均一性(厚度偏差范围、毛细迁移速度偏差范围)应达到规定的要求。
(2)玻⊙璃纤维或聚酯纤维膜及滤纸
玻璃纤维或聚酯纤维膜及滤纸应具有厚度、毛细迁移速度、重量等要求，均一性(厚度偏差范围，毛细迁移速度偏差范围，重量偏差范围)应达到规定的要求。
(3)玻璃纤维膜
适∏用于全血检测的金标试剂，过滤红细胞所用玻璃纤维膜或其他材料具有不吸附蛋白质的特点，应具有厚度、孔径大小等ㄨ要求。
(4)塑料衬片
塑料衬片应具有厚度、硬度(切割时一次未〇能整条切下的百分率)、尺寸(与标■识吻合)、粘性(切割时造成玻璃纤维与塑料衬片分离的百分率)等要求。
(5)其他
粘胶纸、铝箔袋、说明书、包装外盒、瓶子和干燥剂等，应参照国家食品药品监督管理局发布的《体外诊断◢试剂说明书编写指导原则》和《医疗器械说明书、标签和包装标识管理规定》建立相应质量控制标准。
(三)试卐剂盒的制备
本类试剂的生产包括胶体金及胶体※金标记抗原或抗体的制备，胶体金标记的包被，检测线及质控线的制备，胶体金∴标记物、包被抗原或抗体等浓度确定，各种工作溶液的配置等步骤，并通过产品的半成品检验和成品检验两个质控过程来保证其质量符合规定。
1.胶体金标记物的制备
采用枸橼酸三钠还原法或其他方法制备∴胶体金，胶体金颗粒大小应符合规定，胶体金标记物在510~560nm波长处应有最大吸收值，置2~8℃保存，应在规定▅的保存期内使用。采用合适的方法确定胶体∞金标记物、包被抗原或抗体工作浓度，将工作浓度的胶体金标记物吸附于玻璃纤维或聚酯纤维膜上。
2.检测线及质控线的制备
取已确定使用浓度的相关抗原或抗体，在硝酸纤维素膜上制备检测线，应用同样方法制备质控线，根据生产工艺在规定的温度、湿度条件下干燥，置规定♀的湿度(通过验证方法确定相对湿度要求)条件下存放。检测线与质←控线应具有间隔距离要求，应对所用的金标用玻璃纤维及硝酸纤维素膜等进行质量检测，如尺寸、外观、包装及吸附性能等，并记录批号、数目、标识，不同批号的玻璃纤维及硝酸纤维素膜不⊙能混用。
3.贴膜、切割、装袋
贴膜、切割及装袋应在具有相应湿度(通过验证方法确定相对湿度要求)条件下操作，切割的膜条应有宽度要求。
(四)质量控制
用于半成品及成品质量控制的质控品包括灵∑ 敏度、特异性、精密度等↙指标，如具有▂国家标准品(参考品)的产品应使用国家标准品(参考品)或经国家标准品(参考品)标化的企业参考品进行检验。若某类试剂没有国家标准品(参考品)，则使用企业参考品，企业参考品的制备应有规范的质量控制程序，以保证产品的安全性、有效性及质量可控，其质量应不低于国家食品药品监督管理局已经批准的同类产品的质量。
1.半成品质量控制
(1)半成品抽样
检验人员按批号抽取规定数量的半成品，作号标记，待检。
(2)半成品检验
对所抽样的半成品做阴/阳性参考品符合率、灵敏度、特异性、精密度等试剂盒性能方面的检测█，应符合质量标准。
企业应∏该对每一批试剂的半成品进行稳定性研究，并制定相应的质量标准。稳定性试验可在在特定温度或特定条件★下完成。
2.成品质量控制
每一批金标※类检测试剂的试生产量应满足工艺研究、分析性能验证、稳定性研究、临床试验、自测及注册检验等各阶段所需样品量的要求。
一般使用国家标准品(参考品)对成品进行检验，并达到相应质量要求。若该诊断试剂没有国家标准品(参考品)，则使用企业参考品，企业参考品的制备应有规范的质量控制程序，以保证产品的安全性、有效性及质量可控，其质量应不低于国家食品药品监督管理局已经批准的同类产品的质量。
(1)物理检查
应进行外观是否平整，材料附着是否牢固，液体移行速度】，膜条宽度等物理检查，应符合质量标准。
(2)性能方面的检测
阴/阳性参考品符合率、灵敏度、特异性、精密度等试剂盒性能方面的检测，应符合质量标准。
每▽批试剂批放行前，应完成稳定性试验，并达到相应的质量标↘准。稳定性▲试验可在特定温度或特定条件下完成。
四、名词解释
金标类检测试剂：利用胶体金免疫技术，采用胶体金标记的抗体或抗原包被于玻璃纤维膜、聚脂膜或其他载体，将相关抗原或抗体固相连接在硝酸纤维膜，应用层析法的原理检测样品中的抗原或抗体的快速检测试剂。
五、参考文献：
1.《中国生物制品规程》(2000年版)，化学工业出版社
附件5
生物芯片▓类检测试剂注册技术审查指导原则
一、前言
本指导原则主要针对生物芯片类※检测试剂的主要原材料、生产工艺及反应体系、产品质量控制等环节提出指导性技术要求。
本指导原则系对生物芯片类检测试剂的一般要求，申请人应依据产品特性确定其中的具体内容是否适用，若不适用，需详细阐述其理由及相应的科学依据。
本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执㊣行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可☉以采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制订的，随着法规和标准的不断完善、科学技术的不断发展，其相关内〓容也将进行适时的调整。
二、适用范围
根据芯片制作的主要原料和方法】，生物芯片可分为核酸芯片、蛋白芯片、细胞芯片、组织芯片等。本指导原则是针对核酸和蛋白为√检测靶分子生物芯片的注册技术审查指导原则，其他类型靶分子检测的芯片诊断试剂可参考本指导原则。
三、基本要求
(一)基本原则
1.试剂研制、生产用各种原料、辅料等应制定相应的质量标准，并符合有关法规的要求。
2.试剂生产企业应具备相应的专业技术人员、仪器设备以及适宜的生产环境，获得《医疗器械生产许可证》;同时，应按照《体外诊断试剂生产实施细则(试行)》的要求建立相应的质量管理体系，形成文件和记录，加以实施并保持有效运行;还应通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准(试行)》的考核。
3.生物芯片类试剂在研制时，应当按照科学、规范的原则组织研发，各反应条件的选择和确定应符合基本的科学原理。
4.试剂研制、生产过程中所用的物料及工◥艺，应充分考虑可能涉及的安全性方面的事宜。
5.生产和质量控制的总体目标：保证试剂使用安全、质量稳定、工艺可控、检测有效。
(二)原材料质量控制
1.核酸检测芯片
核酸芯片检测时，从生物样本中提取的核酸可用荧光标记、金标︽记和酶标记;检测方法包括光谱学方法和化学ξ 显色。下面为荧光标记芯片技术指导原则，采用金标记和酶联显色等的生物芯片诊断试剂可参照核酸芯片和蛋白芯片相关部分。
(1)主要生物原料
核酸检测芯片的主要生物原料包括模板DNA、dNTPs、引物、探针、标记物等。主要生物原料若为企业自己生产，其工艺必须相对稳定，企业应按照工艺要求对这类生¤物原料进行质量检☆验，以保证其达到规定的质量标准;若购买，其供应商要求相对固定，不能随意变更供应商，同时，供应商应提供相应的质量保证证明和相应的质检报告，达到生产规定的质量标准。如果主要原料(包括工艺)或其供应商有变更，应依据国家相关法规的要求进行变更申请。
①模板DNA
重组DNA：经测序验证卐，关键碱基或序列没有错误。1×TE溶解，浓度为100ng/μl以上，-20℃保存。作为阳性参考品时，其稀释度由企业根据产品标准确定。
②dNTPs(dATP/dUTP/dGTP/dCTP/dTTP)
HPLC纯，PCR级，无DNase、RNase污染，-20℃以下保存。
③引物
生产中的引物原材料为冻干粉，PAGE纯或HPLC纯。用标准DNA模板扩增，电泳检测，谱带单一，大小正确，与对照引物比较，产物量♀一致。符合视为合格引物【，-20℃以下保存。
④探针(用于阵列制备)
重组DNA, 冻干粉(或1×TE溶解液)：至少满足一个批『次的用量，酶切鉴定分析图谱。
PCR产物，冻干粉(或1×TE溶解液)：至少满足一个批次的用量，PCR电泳鉴定图谱。
合成寡核♀苷酸：PAGE纯或HPLC纯，至少满足一个批次的用量，提供该产品的PAGE电泳分析图谱或HPLC分析图谱。
探针∩序列的正确性：应用克隆鉴定的标准DNA杂交鉴定或测序鉴定。
纯度和浓度检测：采用电泳方法，电泳图谱没有杂带，目的条带】的强度与已知浓度的标准DNA条带进行参比计算其强度。纯度ω较高的DNA，可用紫外分光光度计进行定量。检验合格后入库，避光、-20℃以下保存。
⑤标记物
含有激发光〖波长和发射光波长介于280~680nm的所有荧光分子，HPLC纯。
⑥Taq DNA聚合酶
SDS-PAGE 检测，纯度>95%，具有DNA聚合酶活性，无核酸内切酶活¤性;具热□稳定性，94℃保温1小时后仍保持50%活性。产品-20℃保存。
⑦尿嘧啶糖基化酶(UNG)
具尿嘧啶〗糖基化酶活性，无核酸外切酶及核酸内切酶活性。1U UNG 37℃处理3分钟后，103拷贝以下含U模板被降解后不能产生扩增产物。产品-20℃保存。
⑧逆转录(RT) 酶
具有逆转录活性，无核〖酸内切酶活性，-20℃保存。
⑨RT-PCR酶
具逆转录酶活性和DNA聚合酶活性，无核酸内切酶活性，具热稳定性，94℃ 1小时后仍保持50%活性。产品-20℃保存。
⑩缓冲液
各类酶制品所需的反应缓冲液由厂家随酶制品提供，-20℃保存。
(2)主要生物辅料
主要生物辅料包括酶◇类(蛋白酶、核酸酶等)、核酸提取试剂、鱼精DNA、封闭用■蛋白、杂交液等，企业应建立相应的质量标准。主要生物ξ辅料若为企业自己生产(配制)，其工艺必须相对稳定，并按照工艺要求对这类生物原料进行质量检验，以保证其达到规定的质量标准;若购买，其供应商要求相对固定，不能随意变更供应商，同时，供应商应提供相应的质量保证证明和相应的质检报告，达到生产规定的质量标准。
(3)主要化学原辅◣料
化学原材料的质量标准参照《中国生物制品主要原辅材料质控标准(2000年版)》分析纯级♀别进行检验。主要的检测指标包括：溶液外观、一般盐类检测、溶液pH值、溶解情况、干燥失重、炽灼残渣等。
主要化学原材料的供应商要求相对固定，不得随意发生变更。化学原材料在购入时，原材料的生产商必须提供该批①次化学原材料的质量保证材料和①质检报告，其质量标准应达到生产所需的质量标准。
(4)其他物料
①载玻片
外观：明亮处＠ 用肉眼观察无缺刻，无划伤等。规格ω 按设计要求。
激光扫描仪扫★描(波长为芯片检测波长)：包被层基本均匀。
②试管、吸头、试剂瓶等
一次性使用，由生产厂家提供◣质量保证，达到设计要求。
③其他：
包括试剂︼瓶标签、铝箔袋、衬垫、可密封塑料袋、说明书、干燥剂和包装外盒等，应参照国家食品药品监督管理局发布的《体外诊断试剂说明书编写指导原则》和《医疗器械说明书、标签和包装标识管理规定》建立相应质︽量标准。
2.蛋白检测芯片
(1)主要生物原料
与生产的产品质量最密切相关的生物原料包括各种天然抗原、重组抗原、单克隆杭体、多克隆抗体以及多肽类生物原科。这类原料可用于点膜、标记相关酶、纳米金、光学基团及中和反应用抗原或抗体等。使用前应按照工艺要求对这类生物原料进行质量检验，以保证其达到规定的质量标准。主要生物原料若为企业自己生产，其工艺必须相对稳定;若购买，其供应商要求相对固定，不能随意变更供应商，如果主要原料(包括工艺)或其供应商有变更，应依据国家相关法规〖的要求变更申请。
主要生物原料的常规检验项目一般包括：
① 外观
肉眼观察，大部分生物原料为澄清均一』液体，不含异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒;或者为白色粉〒末，不含其他颜色杂质;特殊生物原料应具备相应外观标准。
② 纯度和分子量
生物原料经■SDS-PAGE 电泳后，利用电泳扫描仪进行分析;也可用其他适宜的方法，如高效液相法等进行分析。根据所检测生物原料的分子量选择适宜聚丙烯酰胺凝胶浓度进行电泳。一般每个电泳道加样量为5μg;电泳后的凝胶可用考马斯亮蓝染色或银染法染色。染色后的凝胶用电泳扫描仪分析原料的纯度和分子量，纯度应达到相应的质量标准，分子量大小应在正确的条带位置。
③ 蛋白浓度
蛋白浓度可通过Lowry法、280nm 光吸收法、双缩脲法或其他适宜方法进行检测。
④ 效价
效价的测定一般根据蛋白含量测定结果，通过倍比稀释法进行。效价应达到规定的要求。
⑤ 功能性实验
功能性实验是指生物原料用于试剂盒实际生产中的情况，一般考查使用该原料的试剂的灵敏度、特异性和稳定性等，并比较其与上批次原料的相关性。
(2)主要生物辅料
生物辅料是指在生产过程中作▆为蛋白保护剂用途的一类生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。这些生物原料的质量标准应符合《中国生物制品主要原辅材料质控标准(2000年版)》规定的质量标准要求，并且要适合于企业生产。
建议作以下检验：
① 牛血清或※羊血清
外观：为浅黄色澄清稍粘稠的液体，无溶血或异物
无菌试验：将血清直接37℃放置7天，放在明亮处观ㄨ察，不得出现混浊或沉淀。
总蛋白含量：用双缩脲ξ 法测定，标准为不小于32mg/ml。
球蛋白含量：取待测血清1ml，采用饱和硫酸铵法进行沉淀。沉淀溶于0.85%NaCl溶液至1ml，用Lowry法测定蛋白含量不能大于2mg/ml。
② 牛血清白蛋白：
外观：应为浅黄色、黄色或乳白色的冻干粉末，无吸潮，无结块，无肉眼可见的其他杂质颗粒。
溶解性：将牛血清白蛋白配成10%溶液，溶解时间在◢18~26℃时应不大于15分钟。pH值应为6.5~7.1。
总蛋白含量：用双缩脲法测定，其标准为不小≡于干重的95%。
总蛋白中的牛血清白蛋白(BSA)含量：采用硝酸纤维素膜电泳法，其标准为不小于∴总蛋白含量的95%。
BSA的净含量：总蛋白含量乘总蛋白中的BSA含量，其标准为不小于90%。
③ 酪蛋白：
应符合生产所需的质量标准。
④ 标记用酶
应在产品的质量标准》中明示所使用的标记用酶的名称(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)，同时应№根据不同生产厂家的检验方法和质量标准进行检验，酶的纯度RZ值(OD403nm/OD280nm)应大于3.0。
对于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，还应进行功能性实验，即以其为原料配制一定浓度的稀释液作为样品，进行测定，均不得出现非特异性反应。
生物辅料的供应商同样要求相对固定，不得随意变更供应商。
(3)化学原辅料
参照《中国生物制品主要原辅材料质控标准(2000年版)》分析纯级别进行检验。主要的检测指标包括：溶液外观、一般盐类、溶液pH值、溶解情况、干燥失重、炽灼残渣等。
主要化学原材料的供应商要求相对固定，不得随意发生变更。化学原材料在购入时，原材料的生产商必须提供该批次化学原材料的︼质量保证材料和质检报告，其质量标准应达到生产所需的质量标准。
(4)其他物料
①基质
以硝酸纤维素膜为例：孔径符合设计要求(0.45μm、0.22μm等)、均一性(厚度及毛细迁移速度±20%)、尺寸(与标识吻合)
②试剂瓶和干燥剂
由生产厂家提供质量保证，达到规定要求。
③其他：说明书、包装外盒等
应参照国家食品药品监督管理局发布的《体外诊断试剂说明书编写指导原则》和《医疗器械说明书、标签和包装标识管理规定》建立相应质量控制标准，如数量、规格等。
(三)试剂盒各组分的生产
生物芯片主要包括DNA芯片、蛋白芯片、组织芯片和〇细胞芯片等。生物芯片诊断试」剂产品基本可分成二个部分，一部Ψ分是芯片，另一部分检测用工作液。如果有配套的检测仪器，还需对仪器及处理软件的应用加以说明。
1.芯片的生产
芯片生产的基本过程包括探针的获取方法，纯化，点样，固定。
(1)探针获取
不同芯片，主要是探■针不同，生物芯片的探针主要包括以下几类，其他探针可参考制定相应的技术及质量标准。
① DNA探针的获取
探针的形式包括PCR产物、克隆DNA、人工合成DNA片段等;要求有生产程序和◤质量指标及检测方法，要进行纯化，有固定的纯化程序。
② 抗原的↑生产
抗原获得方法包括细胞培养、从生物材料中分离提取、基因工程表达以及合成肽等。基因工程表达产物◤又分为纯抗原蛋白、融合蛋白等。
③ 抗体
抗体分单克隆抗∴体和多克隆抗体。抗体制备包括细胞培养，动物腹水，基因工程表达等方式。
④ 细胞和№组织
包括细胞或组织类型，固定方法。组织材料包括固∞定，包埋，切片等。
(2)阵列的排列设计
阵列的排列可以是依次排列、随机排列、对角线排列以及其他排列方式，但设计时需考虑重复次数和对照等因素。
(3)点阵的制作
使用仪器的』需要确定型号，程序;手工制作的也应有标准操作①程序。
(4)固定：包括固定方式，固定条件▲等。
应对芯片生产的过程进行相应的质量控制，如点样和固定「过程的监控、点样均一性检验等。
2.工作液配制
(1)芯片生产所需试剂，包括细胞培养基，探针→制备试剂，阵列制作和固定试剂等。
(2)样品处理♂试剂，芯片检测靶分子分为核酸和蛋白质。检测核酸的样品处理试剂包括临床取样、DNA提取或RNA提取试剂，逆转录试剂，PCR扩增试剂，核酸标记试剂等;检测蛋白的处理试剂包括取样试剂，蛋白稀释液以及特殊试剂等。
(3)反应液：检测核酸时的反应液包括预杂交液、杂交液、洗脱液等;检测蛋白时，包括封闭液、抗原/抗体反应液、洗脱液、显色液、显色▆终止液等。
3.数据判读
(1)判断标准及依据，包括Cut off值的确定依据。
(2)数据判读方式：人工还是软件判读。
(3)如果是软件判读，应提供软件判▂断的科学依据(包括█生物学原理、数据获取原理和判断实验是否成立的依据)以及【实验测试的原始报告(或数据)，并需要说明：
①软件的来源：购买或自己编↑制，是否获得注册等。
②软件的用→途：包括≡对数据的分析、存储、解读、含义等。
③软件的使用：基本的使用程序。
(四)半成品质量控制
1.抽样
检验人员按批号抽取检验需要数量的半成品，做好标记，待检。
2.半成品检验
利用上一批检验合格的试剂→盒的相应组分，对本批生产出的各种试剂盒组分分别进行检验，检验结果达到产品的质量标准。
半成品检验，一般使用国家标准品(参考品)或经国家标准品(参考品)标化ㄨ后的企业参考品进行。若某类试剂没有国家标准品(参考品)，则使用企业参考品，企业参考品的制备应有规范的质量控制程序，以保证产品的安全性、有效性及质量可控，其质量应不低于国家食品药品监督管理局已经批准的同类产品的质量。
检测所抽样的半成品试剂盒的性能，包括阴/阳性参考品的符合率、灵敏度(最低检出量)、精密性等，均应达▓到相应质量标准的要求。精密性评价应采用比最低检♀测限高一个数量级的质控品，重复检测10次，判△定结果一致。对定量检测试剂，同时应分析其线性相关系数和定量质控品检测结果的准确性。
企业应该对每一批试剂的半成品进行稳定性测试。稳定性试验可在特定温度或特定条件下完成。对△蛋白芯片，应完成37℃热稳定性试验，试验结果应符合产品的质量标准。
(五)成品质量控制
产品包装完成后，质检人员根据试剂的批号、实际包装量、抽样申请单的要求进行抽样，同时填写抽样数量和抽样日期，并且由抽样人签名。抽样数量应包括检验用数量和留样数量。质检人员同时应检查相关原始记录。
每一批ㄨ生物芯片类检测试剂的试生产量应满足工艺研究、分析性能验证、稳定性研究、临床试验、自测及注册检验等各阶段所需样品量的要求。
1.成品检验
一般使用国家标准品(参考品)或经国家标准品(参考品)标化后的企业参考品进行。若某类试剂没有国家标准品(参考品)，则使用企业参考品，企业参考品的制备应有规范的质量控制程序，以保证产品的安全性、有效性及质量可控，其质量应不低于国家食品药品监督管理局已经批准的同类产品的质量。
2.稳定性试验
试剂批放行前，应完成稳定性试验。稳定性试验可在特定温度或特定条件下完成。对蛋白芯片，每批试剂批放行前▲，应完成37℃热稳定性试验，达到相应的质量标准。
四、名词解释
生物芯片类检测试剂：本指导原则所定义的生物芯片检测试剂＠ 是指将多个生物探针(包括DNA片段，寡核苷酸、抗原、抗体，组织，细胞等)按预先设计的排列方式固定在特制的基质(包▽括玻璃片，尼龙膜，硝酸纤维素膜等)上，用特定的方法提取生物靶分子并进行标记，然后与固定在基质上的生物探针特异性】的结合，再用相应的检测设备(如激光扫描仪、CCD检测仪等)和分析方法(包括软件)进行检测、记录、分析，实现对生物靶分子的定性或定量检测的试剂。
五、参考文献
1.《中国生物制品规程》(2000年版)，化学工业出版社
附件6
一次性使用透析器产品注册技术审查指导原则
一、前言
本指导原则系对一次性使用透析器产品注册申报资料的一般要求，旨在提高注册申报资料质量№及技术审评效率。 申请人/生产企业应依据具体产品的特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。申请人/生产企业还应依据具体产品的特性确定其中的具体内容是否适用，若不适用，需具体↘阐述其理由及相应的科学依据。
本指导原则是对申请人/生产企业和审查人员的指导←性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为Ψ法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可※以采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下⊙制定的，随着法规和标准的不断完善、科学技术的不断发展，其々相关内容也将进行适时的调整。
本指导原则是该类产品注册申报资料一般性要求，注册申报资料︾可依据产品自身特点有所侧重。
二、适用范围
本指导原则适用于直接采用行业标准YY 0053-2008《心血管植入物和人工■器官血液▂透析器、血液透析滤过器、血液滤过器和血液∞浓缩器》及部分采用本标准的透析器类产品，包括传统透析器和高通量(超滤系数大于20ml/mmHg.h)透析器。
三、基本要求
(一)产品的技术报告
产品的技术报告应系统地论述申报产品的研究、设计、开发过程。提供申报产█品的用途、技术特征、产品的设计、工艺方案及有效性验证、安全性评价、标准的制订及依据等技术资料。
1、原材料
(1)材料组成
应明确产品各部分组成材料(包★括透析膜、外壳、封口胶、粘合剂、端盖、密封圈等)的化学名称、分子量、型号(或级别)等。生产企业应尽量选择有相关医学应用史的原材料，同时提供原材料◆生产厂家的资质证明。
(2)材料特性
包括各种原材料的物理、化学特性、质量标准、生物▽学评价资料及相关研究报告。原材料特性是产品最终质量控制的重要因素，建议提供申报产品原材料完整配方(包括增塑剂、添加剂和着色♀剂等)。
2、产品的生◣物学评价
产品的生物ω学评价应参照GB/T 16886系列标准进行(应考虑累计作用时间)，生物学评价应包括下列项目：
(1)细胞毒性;
(2)致敏;
(3)刺激或皮内反应;
(4)全身急性毒性 ;
(5)遗传毒性;
(6)血液相容性 ;
(7)亚慢性＠毒性;
(8)植入;
(9)可沥滤物】化学分析;
(10)附加试验：慢性毒性、致癌性。
3、产品结构组成
申报资料应提供产品结构示意图，标明各部分◎结构，明确不同型号产品之间的区别。其中透析膜的结构是决定产品性能及临床应用效果的关键技术指标，包括：
(1)膜面积】的大小;
(2)纤维数量;
(3)纤维内径;
(4)纤维壁厚;
(5)孔径范围、孔隙率等。
另外，透析膜若有其他特性，如对某些蛋白因子的特异性作用等也应详细阐●明，上述指标应有相应的数据及电镜图片支持。
4、性能测试
透析器性能的描〗述及测试应包括：
(1)密合性;
(2)接口类型;
(3)清除率;
(4)超滤率;
(5)压力降;
(6)预充血容量等。
清除率和超滤率是透析器的两个主要功能参◤数，也是评价透析□器质量的关键指标。常用尿素、肌酐、磷酸盐、维生素B12的清¤除率作为评价透析器滤除性能的指标，对于高通量透析器Ψ 还应提供β2微球蛋白的清除率性能测试或临床评估资料，超滤率(ml/h)是评价透析器对水清除能力的指标。需要注意的是上述指标的试验条件应明确，清除率试验应覆盖生产厂规定的血液流速和透◥析液流速范围，超滤¤率试验应覆盖生产厂规定的跨膜压和血液流速的范围。
注册㊣检验产品型号应是能代表申报产品安全性和有效性的典型产品。对于膜材料和膜结构相同︻的同一注册单元不同膜面积产品，应选择不▲同膜面积(<1.4m2,1.4m2-2.0m2,>2.0m2)产品进行物理性能的注册检验;检测产品具有∮代表性的说明应从产品的材料、工艺、结构及适用范围等方面进行论述，而非产量最大的型号。
标准YY 0053-2008《心血管植入物和人工器官-血液透析器、血液透析滤过器和血液浓缩器》中溶质清除率、超滤率应采用国际通用的表述方式，与1991年版标准比较々其测试条件发生了改变。上述指标的确定应由相应的试验方法作为支持，也可采用标准的试验方法，试验条件应尽可能模拟临床使用条件。
5、灭菌
灭菌方法及灭菌过程的确认与常规控制要求可参见GB 18278《医疗保健︼产品灭菌确认和常规控制要求 工业湿热灭菌》、GB 18279《医疗器械 环氧乙烷灭菌 确认和常规控制》、GB 18280《医疗保健产品灭菌 确认和常规控制要求 辐射灭菌》。无菌器械一般都要求符合10-6的无菌保证水平(SAL)。递交材料应该包括以下信息：
(1)灭菌方法 ;
(2)验证方法和无菌保证水平(SAL);
(3)描①述保证方法 ;
(4)辐照剂量;
(5)环氧乙烷灭菌产品中环氧乙烷及2-氯乙醇残留◣量;
(6)热原相关信息;
灭菌方法的选↓择必须充分考虑灭菌对材料性能的影响以及可能带来的危害作用。灭菌方法应与包装材料相适应，不同的灭菌方法对包装材料的要求不同，如环氧乙烷灭菌，包装既要能◤阻菌，又要能通气，又如用γ射线灭菌产品应考虑射线◥辐照耐受性。
灭菌条件的选择对于灭菌效果也有非常重要的影响，生产企业应提供确定的灭菌方法和详细的灭菌条件、程序步骤。
6、有效期的确定
有效期应根据透析器产品在实时储存条件或加速试验条件下的试验数据确定，试验项□目包括：
(1)应∮用性能测试;
(2)生物相容性试验;
(3)包装完整性检查 。
(二)产品的风险管理资料
生产企业应按照YY/T 0316-2003《医疗器械 风险管理对医疗器械的应用》的要求，对能量危害、生物学危害、环境危害、有关使用的↑危害和由功能失效、维护不周及老化引起的危害等分析及卐相应的防范措施，剩余风险评价等。风险分析报告内容△应完整，至少包括①风险管理过程;②管理体系与相关人员素质;③安全风↑险分析：产品设计、开发，材料的∮选择与使用，产√品制造过程，保管与运输，使用过程，风险的最大危害与分析等◆;④风险的评估：危险的严重水平、风险可接受性等相关内容。
1、申报产品风险分析应包括产品工艺控制的相关数据及研究资料。如♀生产工艺使用粘合剂、溶剂、制√孔剂等对人体有潜在毒性的物质，应提供其毒性及残留量验证情况等评价资料。
2、透析器的灭菌方法及残留物的安全性评价也是重要评估项目。如透析首次使用综合症的发生就和灭菌后残留的环氧乙烷密切相关，不仅不同材料需采用不同的灭菌方法，而且灭菌后ぷ的残留物也不相同，都需进行生物学评价。环氧乙烷残留量的控制可参照行业标准YY 0053-2008《心血管植入物和人工器官 血液透析器、血液透析滤过器、血液滤过器和血液浓缩器》。
3、热原反应是透析器严重的不良事件之一。热原是用灭①菌的方法无法消除的，除内毒素外还存在其它可引起热原反应的化学物质，因此必须从生产工艺及过程控制来防止热原物质侵入产品，进行热原检测时宜用兔法进行检测，而不应仅依赖检测内毒素来判定潜在热原反应的大小。
(三)产品的标准
注册产品标准应根据产品的质控特征确定产品安全有效的技术要求，可直接引用或╳部分采用行业标准《YY0053 心血管植入物和人工器官 血液透析器、血液透析滤过器、血液滤过器和血液浓缩器》，制定注册产品标准的技术指标应不低于行业标准适用条款和说明书中◥产品技术指标描述。对于不适用项目应在标准编制说明中予以说明，注册产品标准中技术要求及试验方法均应经过验证。
(四)产品的临床资料
临床试验资料应严格按照《医疗器械临床试验规定≡》的要求提供，另外，还需注意以下几方面的内容：
1.试验方案
(1)试◥验对象应具有代表性，对入选标准和排除标准应有详细说明。
①入选标准：试验对象∞应具有代表性，试验对象的选择原则上应为透析稳定的慢性肾衰竭成年患者，标明年龄、性别、原发病、特殊要求等。
②排除标准：如试验对象伴有严重贫血，感染，肿瘤，活动出血，严重心、肝、肺脏疾病，精神异常或∞病情不稳定等患者等，或有◢其他不适合试验的情况，如产品有风险◥、对患者有伤害或影响疗效。
(2)如采用对照组】，一般应选择透析参数和膜材料相似的透析器，试验组和对照组的试验条件、方法步骤、临床观察及术后随访时间应一致，对照组与试验组应按随∴机原则分配;如采用∞标准对照，应↘选择行业公认临床指标。
(3)采用多中心研究时各中心★方案应一致。
(4)足够的样本量，符合统计学要求，统计分析应以例为单位，采用经典的、公认的①统计方法、计算公式、统计软件。
(5)临床型号应选择透析器膜面积小于1.5m2 、大于1.5m2 的型号分∩别进行临床试验。
(6)评价指标
①一般指标：血常规。
②生化指标：血浆肌酐、尿素氮、钾、钠、钙、氯、磷、二氧化碳分压(PCO2)、白蛋白、球蛋白、C-反应蛋白、β2-MG(高通量透析器)。
③主要评价指标：透析器肌酐、尿素氮清除率、β2-MG下降率(高通量透析器)。
④次要评价指标：整◣体透析肌酐、尿素氮清除率、尿素下降率(URR)、超滤率、血磷、C反应蛋白(CRP)、血气(透析开始和15min)、产品顺应性。
⑤生物相容性试验：透析开始后15min白细胞、血小板下降率。
(7)评价方法
①超滤率：
超滤率(ml/h)=总除水量(ml)/治疗时间(h)
②透析溶质清除率：
在公式中， 和 采用的浓度单位相同。公式中：
是指血液透析器或血液透析滤过器血液入口的溶▼液浓度;
是指血液透析器或血液透析滤过器血液出口的溶液浓度;
是指产品入口端的血液流率;
是指滤过液流率(超滤率)。
注：平稳透析60min，固定工作状态下血流量和透析液流量∮(通常设置超滤率╱0或者10ml/min),同时从透析器动静▼脉端抽血，检测肌酐、BNU、β2-MG，计算清除率。
③透析溶质下降率：
透析溶质下降率=1-(透析后血浓度/透析前血浓度)%。
注：测定下降率时，在透析开始和结束时抽血，停止超滤，血流量先〇减至100ml/min后，停泵立刻从患者体内抽血。
(8)临床试验记录应准确详尽，包括产品名称及其配套设备、治疗程序、操作方法、使用的药物或试剂、肝素用量、治疗参数(血流量、透析液流量、跨膜压、除水量、治疗时间)的设定、观察指标、取样时间与方式、副反应及处理预案、试验过程实时记录◤、结束时处理、不良事件及处理措施等相关内容。
(9)副反应及处理预案包括(预计本试验中可能出现的副反应及∮如何处理)：
①低血压(处理预案);
②过敏反应(处理预案);
③发烧、毒血症、菌血症、败血症等(处理预案);
④溶血(处理预案);
⑤出血(处理预案);
⑥空气栓塞(处理预案);
⑦破膜漏血(处理预案);
⑧其他意外(处理预案)。
(10)观察指标◤包括：
①生命体征：血压、脉搏、体温、心率;
②患者一般状态：患者自我感觉、首次使用综合症及体征变↓化;
③与使用透析√器相关的数据变化;
④与透析器功→能相关的实验室参数。
2.临床试验报告
(1)临床试验报告应与临床试验方案保持一致。
(2)明确所有病例是否全部完成随访，完成随访病例是否均纳入统计，失访病例需明确失访原因。
(3)提交疗效评价与安全性评价统计过程中所涉→及到的原始数据。
(4)报告所有不良事件发生的时间、原因、后★果及与试验用器械的关系，对于所采取的处理措施需予以明确。
(五)产品说明书◥、标签和包装标识
1.产品标志
产品上的标志至少应◆有下列信息：
(1)生产厂名称;
(2)产品名称;
(3)产品规格型号或生产』厂器件识别代码;
(4)生产批号;
(5)如适用，血液及透析液流向的标识;
(6)最大跨膜压;
(7)有效期;
(8)灭菌方式;
(9)一次性使用的说明▲。
2.单包装上的标志
可在单包装上或透过单包装看到至少应有下列信息：
(1)生产厂名称及地址。
(2)产品名称。
(3)产品规格型号或生产厂器件识别代码。
(4)生产批号。
(5)无菌和№无热原的声明，可有三ㄨ种可能性。
①整个产品包装为无菌和无←热原;
②液体通道(血液和透析液)为无菌和无热原;
③只是血液通道无菌和无热原。
(6)灭菌方式。
(7)有效期。
(8)一次性使用的说明。
(9)应有“使用前请阅读使用说明书”的文ㄨ字说明。
(10)如适用，应有针对超滤控制装置要求的说明。
3.外包装上的标志
外包装上应至少有㊣下列信息：
(1)生产厂名称及地址;
(2)产品名称，外包装中有产品目录及数量的描述;
(3)产品规格型号或生产厂器件识别代码;
(4)生产批号;
(5)无菌及无热原的声明;
(6)关于处理及贮存的警示及说明;
(7)有效期;
(8)如适用，应有针对⌒ 超滤控制装置的要求的说明。
4.随机文件
每个外包装至少应提供下列信息：
(1)生产厂名称及地址。
(2)产品名称。
(3)使用说明书。
①随生产厂≡提供的使用指南(如适用)中关于配套设备的说明;
②体外循环血液管路的连接位置(如适用)及透析管道连接的位置;
③血液透析、血液透析滤过操作步骤中推荐性关于预充、冲洗和终止的说明;
④关于血液流向的说▽明(如适用);
⑤典型的≡连接示意图;
⑥关于抗凝措施和按▓医嘱的说明;
⑦一些配套设备的细节要求。
(4)注意事项与警告：
①压力限制;
②企业推荐的透析液流速限制(只针对血液透析器和血液透析滤过器);
③企业推荐的血液流速限制;
④推荐使用前冲洗产『品的介绍;
⑤需要专门设备的说明;
⑥已知不良事件一览表;
⑦一般或特殊禁忌一览表，诸如“建议不用于儿科”，“无除气的透析液供应系统不得使用”;
⑧关于器件在低于某些流率或低于某种压力下，及在特定方向(水平、垂直等)使用时，性能会削弱的警告和禁忌。
(5)产品规格型号或生产厂器件识别代码。
(6)无菌及无热原的声明，灭菌方式。
(7)一次性】使用的声明。
(8)应包含及指示产品的性能参数。对于新产品，透析器的性能参数应包←括有效膜面积，清除率，筛选系数、超滤率、透析液和血液侧压力降和血室容量，性能参数应包括或提及：
①如适用，说明体外测∏定的结果很可能不同于体内测】定的结果，应估计其数值的差异;
②如适用，说明性能△会随观察时间的长短而变化;
③用于确定性能特性的各种试验方法。
(9)膜的通用名(如适用)和商品名，膜的通用名应包括膜材料的完整的化学名称。
(10)产品的通用描述。这类信息应包括产品的特有的特征，如滤过液流▲率需要特殊专门的控制器或透析△液中泡沫的副作用。
(11)推荐的与透析液接口或滤过液接口的连接器。
(12)对血液管道接头如何与产品连接在一起应规定型号。
(13)产品中直接或№间接与血液接触的结构材料的通用名称。
此外，为全面、完整阐述透析器产品功能结构特性，YY 0466《医疗器械用于医︻疗器械标签、标记和提供信息的符号》中的符号也可以采用。
四、名词解释
1.血液透析：将血液引出体外，主要通过透析№器半透膜的弥散作用，纠正患者血ㄨ液中溶质失衡的方法。
2.多中心临床试验：是指有多名研究者在不同的研究机构内参加并⌒ 按同一试验方案要求用相同的方法同步进行的临床试▽验。
五、参考文献
1.《医疗器械监督管理条例》(中华人民共和国国务院令第276号)，2000.1.4
2.《医疗器械注册管理办法》(局令第16号)，2004.8.9
3.《医疗器械临床试验规定》(局令第5号)，2004.1.17
4.《医疗器械标准管理办法》(试行)(局令第31号)，2002.1.4
5.《医疗器械说明书、标签和包装标识管理规定》(局令第10号)，2004.7.8
6.王质刚《血液净化学》，北京科学技术出版社，2003.9
7. YY 0053-2008《心血管植入物和人工器官 血液透析器、血液透析滤过器、血液滤过器和血液浓缩器》
8. Guidance for the Content of Premarket Notifications for Conventional and High Permeability Hemodialyzers
