实时荧光定量PCR服务
北京方程佰金科技有限公司
实时荧光定量PCR服务
1、技术原理
实时荧光定量PCR是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时检测整个PCR进程，最后通过Ct值与标准曲线的处理对未知样本进行定量分析，是最常用的基因表达分析技术。有绝对定量与相对定量两种定量分析方法。
图1 各种荧光定量曲线示意图
2、服务流程及质控
2.1 实验流程
l 样本的质检
? Nanodrop精准测定，样本消耗量低。
l 引物设计
? 有着多年的经验，比较透彻地掌握这方面∮的规律。
l 内参基因的选择
? 客户自己提供，我们进行验证;
? 我们选择多个内参，进行特定实验优选;
? 很据实验或客」户需求，可同时进行双内参校正
l 检测平台
? ABI 7500(96 well)，50ul 标准体系，满足少量实验需求。
? ABI 7900(384 well)，20ul标准体系，满足大量实验需求，对照设在同板，结果均一。
2.2 实验质控
l 实验严格分区
? 防控污染最有效的方法。
l 可靠的数据
? Ct值在18-30间，数据较准▆确;
? 与样本原始浓度、RT效率及PCR效率有关;
? 反应效率随设计引物差异而相差几十倍，优化的引物使得实验效率最大化;
? 长期实验证实：较长的引物使实验效率显著改进，但易引⊙起非特异，通过实验进一步优化而避免。
实时荧光定量PCR服务
