CCK8全称Cell Counting Kit-8试剂，可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8[化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐]，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye)。生成的甲瓒物的数量与活细︻胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。该试剂主要用途有：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性□　测定、肿瘤药敏试验

　　WST-8属于MTT的升级产品，工作原理△为：在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)。颜色的深浅与●细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。上海创赛提：供WST-8水溶性四氮唑-8，193149-74-5，商品编号：CLS-42493-100mg，价格930元

　　CCK法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

　　CCK法的操作步骤

　　实验一：细胞活性检测

　　1、在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)，将培养板放在培养箱中预培养(37℃,5% CO2)。

　　2、向每∮孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)。

　　3、将培养板在培养▓箱内孵育1-4小时。

　　4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

　　5、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

　　实验二：细胞增殖-毒性检测

　　1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(37℃，5% CO2)。

　　2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。

　　3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如：6、12、24或48小时)。

　　4、向每孔加入10μL CCK溶液(注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)。

　　5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

　　6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

　　7、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

　　注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基)，去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。上海创赛提供供：65162-13-2，1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸甲酯盐[用于生化研究]，商品编号：C12-M1442-200MG，价格1974元

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