这个坑，别栽了！如何应对ELISA基质效应？

　　2001年6月,美国曾爆出过一个大新闻：因为临床▓诊断中，hCG 免疫检测试剂盒得到了假阳性结果，使一位名叫Jennifer Rufer的女性被误诊为癌症，因此经历了长期化疗、肺部手术、甚至子宫切除。当事人把医院和诊断试剂公司告上法庭，获得了1620万美元的赔偿，创下当时医疗事故的最高赔偿金额。

　　胜诉后的Jennifer Rufer

　　痛苦的遭遇，巨额的赔□偿，就因一个hCG检测假阳性结果而起，这太坑了！法院〓把责任判给了诊断试剂公司和医︻院，但这事的始作俑者其实是¤一种被称为“基质效应”的免疫检测干扰现象。

　　基质效应

　　基质是指样品中目标分析物以外的部分，由于基质成分会对分析过程＠有显著干扰，影响分析结果的准确性。业内把这些影响统称为基质效应（Matrix Effects）。这是免疫检测方∮法开发和使用中需要避开的大坑。

　　Jennifer Rufer事件就是一个典型的基质效应造成假卐阳性的案例。该hCG试剂盒用的抗体是鼠源的，业界观点认为部分人群血液含有抗鼠抗体（HAMA），它们对鼠源的捕获抗体和检测抗体都◣有高亲和力，会造成基质效应，导致了假阳性。

　　如何评估基质效应

　　基质效应的●原因错综复杂，但不用担心，有两种简单的方法可以用来评估基质效应。

　　1. 线性稀释：

　　一般来讲，抗原和捕获/检测抗体之间♀的结合作用很强，样品浓度被稀释并不影响它们的结合，而造成基质效应的非特异结合的力要弱很多，如果不断稀释样品，非特异结合造成的干扰会逐步减少，测量值也更接近真实值。没有基质效应时，无∮论如何稀释，测量值都和真实值吻合。而有基质效应时，稀释会造成非特异性结』合比例的减少，测量值也相应地产生很大改变：

　　前文提到，基质效应导致的结果有假阴性和假阳性两种，在线性稀释时就可以辨别出来♀。下图是两组实测的←ELISA产品线性稀释的对比结果，不同品牌的ELISA 试剂盒表现差距非常大：

　　图中的纵坐标代表的是回收率。定义用原液直接检测的值为100%，不同稀释比下的测量值▓先乘上稀释比换算出浓度，再除以原液直接检测的值，比值的百分数，就是回收№率。

　　左图的黄色线，和右图的红色线，曲线平直，回收▽率稳定在90-110%，很好地控制了基质效应的干扰。左图的紫色线，回收率随线↘性稀释严重偏离100%，说明存在⊙显著的基质效应；而回收率升高的趋势，说明稀释前的真实浓度被压低，对应基质效应是假阴性。右图的绿色线也严重偏离100%，但回收率随ζ　稀释降低，于左图㊣紫色线正好相反，属于明显的假阳性基质效应。

　　2. 掺入/回收率实验（Spike/Recovery Assay）

　　基质效应还可以通过分析物的掺入/回收率』实验发现，将低、中和高浓度的分析物掺入到已测定过浓度的样本中，掺入前后实测到的浓度增加部△分与掺入浓度之比就是回收率，回收率以○百分比的形式呈现。回收率介于←80-120%，才符合标准。

　　R&D Systems 让您免受基质效应折磨

　　基质效应可以通过产品研发阶段的优化尽可能去消除的。在ELISA试剂盒领域，R&D Systems是行业金标准，产品是高品质的代名ξ　词，其中一个质量控制指标就是针↑对基质效应的产品优化:

　　1. 量身定制的缓冲液系统

　　优化缓冲液是消除基质效应的重要一环，R&D Systems进行ELISA试剂盒研发时，资深专家们会根据产品类型进行系统的缓冲液优〓化，为每种分析物量身定制最佳的缓冲液组合：

　　Quantikine ELISA Kit包含多种缓冲液，主要是Assay Diluent和Calibrator Diluent两种稀释液，对于差异较大的样◇本，如细胞上清对比血清/血浆，会有专门的稀释♂液分别对应。这些优化后的缓冲≡液体系能很好消除基质效应。

　　2. 排除交叉反应

　　当检测某个分析物时，其他相关因子或类似结构因子如果有非特异性结合，也会☆导致基质效应。为此，R&D Systems在Quantikine ELISA Kit研发时会进行详尽的交叉反应测试：用相关因子单独测试有无非特异性结合，将相关因子和分析物同时测试看是否存在▲干扰。

　　R&D Systems进行大量优化，确保没有明显的交叉反应和干扰，通过◣验证的相关因子都记录在Quantikine ELISA Kit的说明书中，供您参考：

　　3. 严格的基质效应测试

　　R&DSystems 生产〓的所有Quantikine ELISA Kit，都必须▂通过严格的基质效应测试，包括线性稀释和掺入/回收率实验，并把测试结果记录在说明书中：