仪器配置
Ussing Chamber 灌流系统由灌∩流小室、电子系统、数据采集系统以及配套系统四个部分组成。常见的灌流小室配备有1、2、4和8 通道。根据工艺不同,又分为循环式和持续式灌流室。
WPI 公司药物代谢与营养吸收评价系统系统属于经典的持续式▅灌流小室结构,它包括两个溶液贮液器,通过聚乙烯管道将溶液引入两个半室,并通过阀门控制流速。而循环式灌流室包ζ 括一个▽U 形管道和两个半室,两个半室中↘间是一个可嵌合组织样本且可移动的插件。
电子系统包括用于测量跨上皮电压和电ω 流电极、与电压/电流钳相连的导线以及电∑压/电流钳。电压/电流钳由非常灵敏的前置信号放大器、电流和流体阻抗补偿范围、用于电导/电阻测量的脉冲发生器、可通过计算机进行仪器控制和数据采集的远程接口以及LED读数显示器组成←。
数据采集系统是一套综合的数据采集与分析软件包,由数据采集硬件、接口电●缆及DATATRAX软件包组成。
配套系统包括恒温水浴箱、5%CO2+95%O2 混合气体循环系统和注射器等。
工作々原理及特点
1、上皮细胞电生理基础
上皮组织由密集排列〒的上皮细胞和少量细◣胞间质组成,具有极性和紧密连接,这也是区别于其他组织的两大特征。极性是☆因为细胞游离面(或顶面)和基底面结构和功能的分布不均造成的;而紧密连接又称闭锁小带,常见于单层柱状上皮和单层立方上皮中,位于相邻细胞间隙的顶端◥侧面,紧密连接除具机械连接作用※外,更重要的是封闭细胞间隙,阻止细胞外的大分子物质经细胞间隙进入组织内。紧密连接的形状和渗透性决↘定上皮组织的完整性以及对物质的阻抗力(Rt)。
上皮细胞♂膜上的蛋白质逆着离子浓度梯度将离子从膜的一侧转运向另一侧,转运过程中》产生跨膜电势,被称为Vt。产生Vt 的前提是上皮细胞膜顶侧和基底侧离子的分布是Ψ 不均匀的。细胞膜顶侧电势(Va)和基底侧电势(Vb)之差即为Vt。通过对上皮细胞钳制电流可完成Vt 的测定,这就是通常所★说的短路记录,在研究上皮物质的吸收以及分泌机制方面极为有用。对于吸收组织,Va 主要由Na+通ξ道活性决定;而对于分泌组织,Vb 则主要受Cl-导电〓性能决定。
2、Ussing Chamber
WPI经典的Ussing Chamber操作简单,容易控制温度,清洗及排放方便;Ussing Chamber由固体丙烯酸制成,8个接口(如有排液功能ζ 则为9个接口),分别为液体入(液体出,有排液功能者)、电极连接、琼脂桥连接。接口均为LUER形,方便电极、连接管的无渗『漏连接。其中四个电压和电流的电极接口是凹形,可避免小室中气泡◇形成。小室两侧各有一个液体分隔小室,由上皮膜隔开,不同型号的小室分隔体积ㄨ会有区别,见说明。
3、循环贮︽液器
循环贮液器由硼硅玻璃材料吹制而成,为一个夹层结构,用于温度的控制。有两「个规格:#5210为20ml/侧;#5362为10ml/侧,(容量小更适合使用昂贵◣的化学品)。贮液器的凝集※管帽可以防止气泡及湍流的形成。
4、恒温水浴
● 带有LED 温度显示(0.1℃分辨率);
● 不锈钢浴槽,PID 温度控制;
● 高温和干燥运行时,系统自动进行停止防护▅;
● 如果有需╳要,可以进行系统容量扩展;
● 内部浴槽可以同时运用于更小的物体上;
● 可用自来水连接建立╲冷凝管降温;
(自来水冷凝标准参数范围:20-100℃)
5、跨膜电阻仪①:EVOM2
可以用来完成培养的单层上皮或粘膜细胞的电阻测量。
6、多通道电压→电流钳:EVC4000
多通道电压电流钳EVC4000使用电压钳制技术来监测由于膜电位的变化或某些化学物质导致的生物膜渗透性的改变。当多通』道电压电流钳和WPI公司USSING CHAMBER、专利的EKC和EKV管壳电极一起应用时,可以使用安全适度的电压,同时对四个〗样本生物膜进行电压或电流钳制。
管壳电极的优良设计无需使用100v电压来︾推进电流移动,这种安全的低电压系统更加容易调节和使用。
每一个模块及其配套的前置放大器,都能够独立地以下面的三个模式中的任一模式进行非常稳定和精∏确的操作:
电压钳制(VC)、电流钳制(CC)或开环电位(PD)测量。
EVC4000可以通过仪器的前板来控々制,也可以通过计算机生成的命令从仪器后板输入来控制。
EVC4000最独特的一个特征是前置放大器上的一个电子稳压器可以保持浆◤膜面电极的电位相对于系统接地的零点不变,前置放大↑器主动地维持测试膜的一个表面在所有测试情况下接近零电位。
可应用的领∩域:
1、用于药物代谢动□力学的研究:如研究药物在胃肠道的吸收,转运机制;或药物经皮肤吸收,转运机制的研究;
2、用于胃肠道异←常功能的研究:正常胃肠道粘膜组织或非正常的胃肠道粘膜组织,如缺血缺氧、炎症反应、营养【障碍等微生态环境改变时导致的胃屏障功能的变化;
3、用于营→养物质转运机理研究:对葡萄糖、小肽、游离脂肪酸、氨基酸ㄨ和矿物质元素等物质吸收转运效率的研究;
4、用于其它上皮组织的研究:
● 肾小管内皮细胞对营养物质或药物的排泌功能研←究;
● 皮肤上皮细胞对营养物质和药物的吸收机能的〖研究;
● 其它组织包括大鼠结肠、小鼠回肠、青蛙皮肤、气管平滑『肌、牛眼视网膜、兔膀胱壁、支气管粘膜等。
目前整套系统已经获得众多科研机构及药物研发⌒ 机构的高度认可,更被广泛应用,中国境内包括浙江大学第一附属医院、雅培制药中国研发中心、中山大■学药学院、西北农林科技大学动ξ物学院、南√京中医药大学、第三军医大学大坪医院、广东省中医院等数十家机构。