366nm台式※紫外灯,大肠埃希氏菌荧光检测灯 内置 6W自滤波紫外灯管通过滤光片(面积:200X50MM)滤去可见光发出在30cm距离内@ 产生366nm 波长紫外光,强度约为1200 μW/cm2,观察各种有荧光出现的检测结果,如水中大肠埃希氏菌在含MUG 的培养基中培养后,会产生荧光ζ反映。该紫外灯,使用方便、安全、可靠。 可应用于医疗卫生、食品安全监〖督、各级疾病控制中心、各级工商、检验检疫、自来水厂、矿泉水厂、饮料厂、海洋监测、质量监督、环境保护等部门
大肠埃希氏菌▆定义
大肠埃希☉氏菌是指能产生β-半乳糖苷酶(β-D-galactosidase)分解ONPG(Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside)使培养液呈黄色,能产生β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase)分解MUG(4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide)使培养△液在波长366nm紫外光下产生荧光的细菌。
检测ㄨ重要性
《生活饮用水标准检验方法》GB/T 5750-2006中将大肠埃希氏菌列入检测项目中。并在解读《生活饮用水卫︼生标准》GB5749-2006中阐述:“只有埃希氏№大肠杆菌是粪源特异性的,是最准确和专一的粪便污染指示”。
一、参数:
电压:220v 50HZ
功率:6W
波长:366nm
滤光片:200X50mm (方便培养基板的检▓测)
辐照:30CM 内 无需暗室可直接检测
BD-A 手提:300X60X90 MM 重量:0.8KG
BD-AA 台式:280X220X420MM 重量3KG
BD-AAA 暗箱式:全封闭设计,无紫外泄露【,配防紫外∩观察窗,全方位保护人体安全→,
规格:390X340X450cm重量15Kg
二、用途 :大肠埃希氏菌测定荧光观察使用方法:插上电源,将经过24小时培养后的EC-MUG管在◢灯下照射,如有蓝色荧光产生则为大肠埃希⌒ 氏菌阳性管;
三、注意事项:每次观察时,用一个★没开封的EC-MUG管和被测的EC-MUG管在紫外光灯同时观察,如果被测的EC-MUG管产ζ生荧光,在紫外光灯下与没开封▽的EC-MUG管比较,有明显的区别。每次测试完后将电源拔掉。
四、具体方法:取供试液10ml(相当于供试品1g、1ml),直接或处理后接种至♂适量(不少于100ml)的胆盐乳糖培养基中,培养18--24小时,必要时可延长ζ 至48小时.
取上述培养物0.2ml,接种至含5mlMUG培养基的试管内,培养,于5小时、24小时在366nm紫外⊙线下观察,同时用未接种Ψ的MUG培养基作本底对照.若管内培养物呈现荧光,为MUG阳性,不呈现荧光,为MUG阴性.观察后,沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液,液面呈玫↙瑰红色,为靛㊣ 基质阳性,呈试剂【本色,为靛基持阴性.本底对照应为MUG阴性和靛基质】阴性.
如MUG阳性,靛基「质阳性,判供试品检出大肠埃希菌;如MUG阴性,靛基质阴性,判供试品未检出大肠埃╲希菌;如MUG阳性,靛基质阴性,或MUG阴性,靛基质↓阳性,则应取胆盐乳糖培养基的培养物划线接种▆于曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基的平板上,培养18--24小时.
若平板上无菌落生长,或生长的菌落♀与表所列的菌落形态特征不符,判供试品未检出大肠埃希菌.若平板上生长的菌落与表所列的菌落形态特征相符或疑似,应进行分离,纯化,染色镜检和适宜的生化试验,确认︻是否为大肠埃希菌.
大肠菌形态特征
曙红亚甲蓝:呈紫黑色、浅紫色、蓝紫色或粉红色,菌落中心呈深紫色或无明显暗色中心,圆形,稍凸起,边缘整齐,表面光滑,湿润,常有金属光泽
(1)MUG法不必从混合◆菌中分离单个菌落。除乳糖复发酵培养基外,尚有部分志贺菌属、沙门菌属的菌株,以及少数革兰阳性球菌、杆※菌和芽孢菌,其MUG为阳性。因此,在MUG培养基成分中增加了去氧胆酸钠,可排除革兰阳性菌的干扰。至于志贺菌、沙门菌在胆盐乳糖培养基中较难生长,即使♂有生长,本卐法也能检出。既然药品中不得检出大肠埃希菌,更不允许检出志贺菌、沙门菌。
(2)配制MUG培养基时,务必校正pH,灭菌后pH不得过7.4,否则pH偏高,MUG分解,本身则显荧光;分装MUG培养基的试管应挑选,试管、蛋白胨不得显Ψ 荧光。
(3)培养时间:供试品培养液接种于MUG培养基中的培养时间,一般在4h、24h 观察是否产生荧光,如荧光很微弱,不能准确判断时】,该延长培△养至48h再观察结果。由于大肠埃希菌各菌株间的MUG的属性不完全相同,对底物和底物浓度反应的差异;培养基中〖选择因子的影响;培养时间;温度;pH的改变;大量竞争菌和样品本身物质成分◥的干扰等;对结果的判断亦有影响。
(4)结果观察:取供试品的MUG试管、阳性对照管。阳性对照管♀同时在366nm紫外灯下观察,阳性对照【管应有较强蓝白色荧光,阴性对照管无荧光。试品MUG管是否有荧光,应仔细观察比较,或将各管调换位○置(阴性管居中),适当倾斜试管,阳性对照管荧光强烈,影响供试品管与阴性对照管的观察时,亦该∮移去阳性对照管。
(5)药品中污染的乳糖复发酵培养基,易受生产工艺及药物的〖影响。在曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂平板上的菌落形态特征有变化时,挑取可疑菌落往往凭◣经验,主观性较大,务必挑选23个以♂上菌落分别做IMVIC试验鉴别,挑选菌落越多,挑选阳性菌的机率越高,如仅挑选一个菌落 IMVIC试验的鉴别,则易漏检。
(6)在IMVIC试验中,以灭菌接种针沾取菌苔,首先接种■于枸橼酸盐琼脂斜面上,然后接种于蛋白胨水培养基、磷酸盐葡萄糖胨水培养基中。切勿将培养基带』入枸橼酸盐琼脂斜面上,以免①产生假阳性结果。枸橼酸盐利用试验培养时间,原定为2d,根据试验资料,发现培养3d后,枸橼酸盐利用试验产生阳性。仅培养2d是不够的,故试验培养时间改为2—4d。
(7)阳性对照试验是∑检查供试品是否有抑菌作用及培养条件是否适宜。阳性对照菌液的制♂备、计数及加入含供品的乳糖复发酵培养基中等操作,不能在检测供试品的无菌室或净化台上进行,必须在单独的隔离间或净◎化台操作,以免污㊣ 染供试品及操作环境。
(8)在各类供试品中检测大肠杆菌及其他控制菌,按一次检出结果为准,不准抽样复检。检出的大肠埃︾希菌及其他控制菌培养物须保留 1 个月,复查。